李燕芳

[摘 要]氧乐果是每年广东省农业厅组织的全省农产品质量安全检测技术能力验证的必考项目，也是日常工作的监测项目。氧乐果是有机磷农药中回收率比较难做得好的一种，如果氧乐果回收率做得准确，其他的很多有机磷农药就可做得好。本文依照《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》NY/T761-2008[1]这一标准，对氧乐果的回收率进行检测，提出了检测过程应注意的事项，提出了如何把氧乐果回收率做得最好。

[关键词]氧乐果；回收率；注意事项

[中图分类号]TS207.53 [文献标识码]A

氧乐果又名氧化乐果，氧化乐果对害虫和螨类有很强的触杀作用，尤其对一些已经对乐果产生抗药性蚜虫，毒力较高，在低温期仍能保持较强的毒性。主要用于防治香蕉多种蚜虫、卷叶虫、斜纹夜蛾、花蓟马和网蝽等的良好药剂，低温期氧化乐果的杀虫作用表现比乐果快。 然而需要注意的是因为氧化乐果还有很强的内吸杀虫作用，可以被植株的茎、叶吸进植株体内，并可传送到植株各个部位，因此很容易造成农药残留，作为高毒农药的杀虫剂，“氧化乐果”是一种用于果树或绿化类植物的杀虫剂。

在蔬菜生产过程中，“氧化乐果”属于违禁使用农药，而在农业部公布的禁止和限制使用的农药名单上是禁止氧乐果在甘蓝上使用的。 农业部、省农业厅和我单位，每月都有对蔬菜和水果中的氧乐果进行例行检查。每次检测，笔者都对氧乐果进行回收率验证。以下是氧乐果的回收率检测过程及各个环节的注意事项。

1 原理

试样中有机磷农药经乙腈提取，提取溶液经过滤、浓缩后，用丙酮定容，用自动进样器注入气相色谱仪的进样口，农药组分经不同极性的两根毛细管柱分离，火焰光度检测器（FPD磷滤光片）检测。用双柱的保留时间定性，外标法定量。

2 试剂材料与仪器设备

（1）试剂与材料：除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682中规定的至少二级的水。乙腈；丙酮，重蒸；氯化钠，140 ℃ 烘烤4h；滤膜，0.2um，有机溶剂膜；铝箔。

（2）仪器设备：气相色谱仪，带有双火焰光度检测器（FPD磷滤光片），自动进样器，不分流/分流进样口；分析实验室常用仪器设备；食品加工器；旋涡混合器；匀浆机；氮吹仪。

3 农药标准溶液配制

（1）购买来的氧乐果标液是100 mg/L，吸0.4 mL到10 mL的容量瓶中，用丙酮定容至10 mL（浓度为4 mg/L），用于做加标的标液。

（2）配制氧乐果标准曲线：配0.02、 0.05、0.10、0.15、0.20mg/L 的5个浓度的标液。

4 加标过程

选取番茄做加标样品，番茄样品无残留，在250mL三角瓶中准确称取25.0 g样品，用移液枪向样品中，分别添加浓度为4 mg/L的氧乐果标液0.25、0.5、1mL， 即加标样品中氧乐果的浓度分别为0.04、0.08、0.16mg/kg，每个浓度做3个平行样，同时做空白样品。

5 前处理步骤

（1）提取：把样品放入匀浆机中，加入50.0 mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2 min。

（2）净化：匀浆后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠的100 mL具塞量筒中，收集濾液40mL～50mL，盖上塞子，剧烈震荡1 min，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。

（3）浓缩：从具塞量筒中吸取10.00 mL乙腈溶液，放入150 mL烧杯中。将烧杯放在80 ℃水浴锅上加热，烧杯内缓缓通入氮气流，蒸发近干，加入2.0 mL丙酮，盖上铝箔，备用。将上述备用液完全转移至10.0 0mL刻度试管中，再用丙酮分三次冲洗烧杯，并转移至试管，最后定容至5.00 mL，在旋涡混合器上混匀，分别移入两个2 mL进样瓶中，供色谱测定。如定容后的样品溶液过于混浊，应用0.2 um滤膜过滤后再进行测定。

6 测定

6.1 色谱参考条件

（1）色谱柱：14%氰丙基苯基（其中7%氰丙基7%苯基）86%甲基硅酮，中极性毛细管柱（DB-1701），30m×0.25mm× 0.25um，或相当者。

（2）温度：进样口230℃；柱温120℃-8℃/ min -210℃ （4min）-30℃/ min -250℃；检测器270℃。

（3）气体及流量：载气：氮气，纯度≥99.999%，流速为1.3 mL/min；燃气：氢气，纯度≥99.999%，流速为80 mL /min；助燃气：空气，流速为120 mL /min。

（4）进样方式：不分流进样。

6.2 色谱分析

由自动进样器分别吸取1.0uL标准溶液和净化后的样品溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以获得的样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

7 结果

（1）色谱图：在上述前处理过程及色谱条件下，得到氧乐果的标液、加标样品、空白样品、标准曲线的色谱图，如图1～图4所示，加标样品图谱无干扰，氧乐果出峰良好。

（2）标准曲线和最低检出限：在实验条件下，以峰面积为X横坐标，浓度为Y纵坐标绘制标准曲线（见图4），测定浓度范围为0.02～0.20mg/L，标准曲线的相关系数为0.9999；以基线噪声3倍峰面积对应的质量浓度为检出限（S/N=3），检出限为0.02mg/kg。

（3）加标回收率和精密度：3个浓度的回收率（见表1），在回收率的合格范围内；精密度RSD值也在合格的范围内（见表1）

图1 氧乐果标样（0.10 mg/L）的色谱图

图2 加标样品中氧乐果（加标浓度0.08 mg/kg）的色谱图

图3 空白样品的色谱图

图4 氧乐果标准曲线图

表1 样品中氧乐果加标回收率和精密度实验

加标浓度

（mg/kg） 平均值

（mg/kg） 平均回

收率（%） 回收率的合格范围（%） RSD

（%） RSD的合格

范围（%）

0.04 0.034 85.0 60～120 1.68 ≤20

0.08 0.066 82.5 60～120 0.87 ≤20

0.16 0.13 81.3 80～110 4.33 ≤15

8 实验过程注意事项与讨论

8.1 配制氧乐果标液的注意事项

（1）至少配制5个点，浓度尽可能覆盖一个数量级，加标的浓度要包含在5个点内。

（2）要用样品基质来配制标液，因为氧乐果有基质效应，受基质影响大，需要基质配标液，消除基质效应。经过多次试验，同一浓度的标液，用基质配制标样与用丙酮配制标样，峰面积要大很多（见图5和表2）；回收率要偏高很多（见表2）。

图5 氧乐果标液（0.10mg/L）用基质和丙酮配制的峰面积比较图

表2 氧乐果标液用基质和丙酮配制的峰面积和回收率

标液浓度

（mg/L） 丙酮配标液的峰面積 基质配标液的峰面积 丙酮配标液的回收率（%） 基质配标液的回收率（%）

0.05 337268.6 464529.2 127.5 85.0

0.10 510422.6 932416.6 162.5 82.5

0.20 1203727.2 1846773.1 131.3 81.3

（3）配标液的移液枪要经过校准，是准确的；使用移液枪前，要先学习移液枪的正确使用方法，既枪头要旋紧，吸液体时，要先洗枪头1次，移液时，要缓慢吸起来；各个浓度的配制过程要一致。

（4）标准曲线的R值不应低于0.99；若R值小于0.99，证明曲线配制不准确，不能用于定量，要重配标液。

8.2 加标的注意事项

（1）不要选葱、蒜、萝卜等样品做空白样品，因为这些物质由于基质效应引起的干扰大，出了很多杂峰，会影响目标峰， 所以选番茄、黄瓜做空白样品，样品的基线很干净。

（2）加标的移液枪或移液管要经过校准的。

8.3 提取过程的注意事项

（1）换样品时，要清洗匀浆机3次，避免交叉污染。

（2）平行样品的转速与匀浆时间要一致，结果才能平行。

8.4 净化的注意事项

（1）先要挑选不会漏液的具塞量筒，剧烈震荡时，才能避免漏液而结果不准确。

（2）用手振荡的过程中，两手要握紧，用力左右剧烈振荡，力度与时间要足够，氧乐果与水才能充分分离。

（3）加氯化钠要足够，静置的时间要足够。因为此步骤的目的是，让有机相乙腈（带着氧乐果）与水完全分离。氧乐果是易溶于水的农药，但不溶于氯化钠溶液，所有水都与氯化钠溶解成氯化钠溶液，氧乐果就完全与水分离了。若静置后，具塞量筒底部没看到氯化钠，那有可能氯化钠加得不够。

（4）静置后不分离而是出现混浊，可离心或延长静置时间。

8.5 浓缩的注意事项

（1）氮吹仪的气流应先调好，每个样品的气流大小控制一致，保证每个烧杯中的液面都会晃动，气流要缓慢，防止样品溅出。

（2）样品浓缩时，要吹至近干，最好吹至0.5 mL，太干了，回收率会减少（见图6和表3）。吹至近干是做好回收率最关键的一步，因为氧乐果对热不稳定，吹干对易挥发、蒸汽压较高的农药有影响，有些农药组分有溶剂在时，挥发会较慢，而一旦溶剂蒸干，农药组分挥发就会很快了。

图6 氧乐果加标样品氮吹至近干和氮吹很干的峰面积比较图

表3 氧乐果加标样品氮吹至近干和氮吹很干的回收率

加标浓度

（mg/kg） 氮吹很干的平均值

（mg/kg） 氮吹很干的回收率

（%） 氮吹至近干的回收率（吹至0.5ml）（%）

0.04 0.026 65.0 85.0

0.08 0.055 68.8 82.5

0.16 0.10 62.5 81.3

（3）要防止局部过干，所以烧杯中的液体较少时，就要摇晃烧杯直到近干，马上拿出，加上丙酮。

（4）选的10.00 mL 刻度试管要经过校准的，可送去权威机构校准，也可自己校准。自己校准的方法是用天平称量法（在20 ℃时，用10.00 mL刻度试管称5g水，看是否是5 mL，如果是，证明试管是准确的，否则就不准确。）

8.6 测定的注意事项

（1）气相色谱仪要先维护好，氧乐果很容易被吸附，所以进样口的衬管和石英棉要硅烷化。并且衬管不能脏，因为衬管脏了，会使氧乐果被吸附而造成结果不准，并且会出现鬼峰而影响定性判断。

（2）色谱柱要割好，一般割10cm 以上，因为高沸点物质会残留在柱头，影响柱效，产生鬼峰。

（3）进样口、色谱柱和检测器要先老化，保证仪器干净，处于好的状态。

9 结语

实验的过程中，主要注意以下几个重要步骤：

（1）所有的定量器具都要经过校准，确保准确。

（2）氧乐果标液配制的过程中要注意基质效应，即要用基质配制标液。如上述实验，同一浓度的标液（如浓度0.10 mg/L），用丙酮配制比用基质配制的峰面积要小1倍（如图5），这样会造成回收率高1倍（如表2）。因为氧乐果是强极性的农药，会有基质效应，需要基质配标液，消除基质效应。

（3）浓缩过程，氮吹至近干是做好回收率最关键的一步，如上述实验，吹得干的回收率比吹至近干的回收率约低20%（如表3），在一般情况下，氧乐果回收率约80%，如果再损失20%，就更容易不合格。

[参考文献]

[1] 中华人民共和国农业部. NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[M].北京：中国农业出版社，2008.

[2] 中华人民共和国卫生部.GB/T5009.1-2003食品卫生检验方法理化部分总则[M].北京：中国标准出版社，2003.

[3] 国家质量监督检验检疫总局.GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测[M].北京：中国标准出版社，2008.