陈　凯　薛　亭　王艺舟　潘启华　于　淼,　陈天圣

(1. 华中农业大学水产学院, 农业部淡水生物繁育重点实验室, 武汉 430070; 2. 河南师范大学水产学院, 河南省水产动物养殖工程技术研究中心, 新乡 453007)

转基因技术是生物学研究中的一个热点, 构建稳定的转基因鱼类细胞系对研究鱼类基因功能和转基因鱼具有重要价值。在鱼类细胞中, 外源基因整合效率偏低, 稳定的转基因细胞系难以获得, 因此寻找一种稳定高效的转基因方法在鱼类转基因研究中尤为重要。

睡美人(Sleeping Beauty, SB)转座子属于Tc1/mariner转座子家族, 普遍存在于脊椎动物基因组中。但在生物体漫长进化过程中由于突变累积失去了活性。1997年Ivics等[1]在鲑科鱼类基因组中运用生物信息学方法恢复了转座子的活性。SB转座子能携带外源DNA在转座酶的催化作用下, 以“剪切和粘贴”的方式发生转座, 偏向于随机插入基因组中TA序列处[2]。2009年Mates等[3]通过高通量定点突变得到目前转座活性最高的转座酶SB100X,它能显著提高SB转座子转座效率。SB转座子系统是一种很好的基因转移载体, 具有整合效率高、外源基因能长期稳定表达、低拷贝整合、插入位点随机分布等特点, 因此它被广泛运用于转基因、插入诱变、基因治疗等研究中[4]。其他转座子如piggyBac[5]、Tol2[6]、Tgf2[7]等也常被作为基因转移载体, 但有研究表明SB转座子比piggyBac和Tol2转座子具有更高的转座活性[8,9]。SB转座子系统能在体细胞[10]、T细胞[11]、干细胞[12]等多种细胞中介导外源基因高效整合。Gallardo-Galvez等[13]发现了SB转座子系统在多种鱼类细胞中具有转座活性。……