徐丽霞 毛根珍 林群 雷永良 刘敏

[摘要] 目的 探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）相关自身抗体对HIV病毒不同筛查方法的影响，为临床中出现的HIV检测结果假阳性提供解释依据。 方法 選择2015年7月～2016年7月我院接诊的90例RA患者进行检测，按RA抗体类风湿因子（rheumatoid factor，RF）值高低分为RF<18 U/mL组（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）值高低分为抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组（n=39）和抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组（n=51），采用快速胶体金法、酶联免疫吸附法（ELISA）及电化学发光法（ECLIA）对所有患者进行血清HIV病毒检测，阳性标本采用免疫印记确认实验，并采用ELISA法对所有患者RF及抗CCP抗体进行检测。 结果 快速胶体金法和ELISA法所检测的所有患者结果均为阴性，ECLIA法检测出12例患者HIV抗体呈阳性，阳性标本采用免疫印记确认，结果均为阴性，差异有统计学意义（P<0.05）；ECLIA法检测RF-IgM<18 U/mL组的HIV抗体呈阳性患者1例，RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗体呈阳性患者分别为11例、3例，差异有统计学意义（P<0.05）；抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组中HIV抗体呈阳性患者2例，抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组HIV抗体呈阳性患者12例，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 类风湿关节炎高滴度的自身抗体对ECLIA法检测患者HIV抗体具有一定的影响，会导致假阳性的产生，因此多种检测方式进行筛查是有必要的。

[关键词] 类风湿关节炎；抗体；筛查方法；HIV病毒

[中图分类号] R593 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）06-0124-04

[Abstract] Objective To investigate the influence of autoantibodies associated with rheumatoid arthritis（RA）on different HIV screening methods and to provide an explanation basis for the false positive of HIV test results in clinic. Methods 90 RA patients admitted in our hospital from July 2015 to July 2016 were enrolled in the study. According to the rheumatoid factor（RF） value of RA antibody， the patients were divided into RF<18 U/mL group（n=33） and RF>300 U/mL group（n=57）. According to anti-cyclic citrullinated peptide（anti-CCP） value， the patients were divided into anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group（n=39）and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL group（n=51）. Serum HIV was detected in all patients by rapid colloidal gold assay， enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）and electrochemiluminescence（ECLIA）. The positive samples were confirmed by immunoblot. The RF and anti-CCP antibodies in all patients were detected by ELISA method. Results All the patients tested by rapid colloidal gold assay and ELISA showed negative results. HIV antibodies in 12 patients were positive detected by ECLIA method and positive samples were confirmed by immunoblot. The results were negative（P<0.05）. There was 1 patient with HIV antibody-positive detected by ECLIA test in RF-IgM <18 U/mL group. There were 11 and 3 HIV antibody-positive patients in RF-IgM>300 U/mL and RF-IgG>300 U/mL group， respectively， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. There were 2 and 12 cases of HIV antibody positive in the anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL HIV group， and the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The high titer of autoantibodies to rheumatoid arthritis may affect the detection of HIV antibodies by ECLIA and lead to false positives. Therefore， a variety of testing methods for screening are necessary.

[Key words] Rheumatoid arthritis；Antibodies；Screening methods；HIV

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是一種可对人类免疫系统造成缺陷并感染的慢性病毒，在病毒分类学中属于逆转录病毒[1]。据调查，HIV病毒于1981年美国首次发现。HIV病毒通过对人体T淋巴细胞进行破坏，阻断了细胞及体液免疫过程，使人体免疫系统呈现瘫痪状态，最终导致各种疾病感染蔓延，形成艾滋病[2-3]。目前HIV-1和HIV-2两种HIV型已经被发现，其病毒结构和传播的方式均极为相似。近年来，我国HIV病毒感染患者及艾滋病患者数量逐年上升，个别地区已经属于快速增长期，形式极为严峻[4]。目前，国内外对HIV抗体的筛查方式较多，由于检测原理不同将其主要分为快速胶体金法、酶联免疫吸附法（ELISA）及电化学发光法（ECLIA），可快速或常规对患者血液、尿液及唾液进行HIV筛查[5-6]。为了进一步探讨RA相关自身抗体对不同筛查方法检测HIV病毒结果的影响，我院选取了90例RA患者采用不同方式进行HIV病毒筛查，并且为了有效缩短窗口期，避免患者于窗口期传染，采用将HIV抗原和抗-p24抗体共同包被的第4代抗原抗体双监测系统的双抗原夹心法试剂盒，同时对患者抗原和抗体进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选择2015年7月～2016年7月我院接诊的90例RA患者进行检测，所有患者均符合类风湿性关节炎分类标准，其中男52例，女28例，年龄38～62岁，平均（46.57±12.38）岁，病程1～21年，平均（12.23±3.64）年。按RF值高低分为RF<18 U/mL组（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗CCP抗体值高低分为抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组（n=39）和抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组（n=51）。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 取所有患者空腹静脉血4 mL，采集时避免溶血，且采集后将标本放置1～2 h，血液凝固且血块已经收缩后以3000 r/min进行离心，时间为5 min，取出血清。需保存的血清应置于-20℃以下环境，以待检测。

1.2.2 检测方法 采用3种检测方式对标本进行HIV病毒检测：①快速胶体金法；②酶联免疫吸附法（ELISA）；③电化学发光法（ECLIA）。快速胶体金法（试剂盒由山东康华生物有限公司提供）及ELISA法（试剂盒由上海科华生物工程有限公司提供）包被抗HIV-1和抗HIV-2抗体；ECLIA法（试剂盒由罗氏诊断有限公司提供）包被抗HIV-1、抗HIV-2抗体以及HIV-1 p24抗原；ELISA法检测患者类风湿因子及抗CCP抗体。检测仪器选择美国1575型洗板机和Bio2Rad550 酶标仪，所有检测操作均严格按照说明书进行。

1.3 观察指标

①对所有患者采用快速胶体金法、酶联免疫吸附法及电化学发光法进行检测，并将检测结果记录；②阳性标本采用免疫印记确认实验；③检测RF浓度对ECLIA法筛查HIV抗体的影响，RF浓度分为两种，即RF<18 U/mL和RF>300 U/mL；④检测抗CCP抗体浓度对ECLIA法筛查HIV抗体的影响，抗CCP抗体浓度分为两种，即抗CCP抗体浓度<25 RU/mL和抗CCP抗体浓度>500 RU/mL。

1.4 统计学方法

数据用SPSS 18.0软件包处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料的比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 所有患者三种检测结果比较

90例患者采用快速胶体金法及酶联免疫吸附法进行检测，结果均为阴性；电化学发光法检测结果中，12例患者HIV抗体呈阳性，以上三种检测方法所检测的结果差异有统计学意义（χ2=25.1163，P<0.05）。阳性标本验证采用免疫印记确认实验，其中HIV-p24抗原不确定患者9例，阴性患者3例；经1个月观察后进行复查，7例患者由阳性转为阴性，2例患者仍然为不确定；经3个月观察后重新采血进行检查，结果均转为阴性。

2.2 RF浓度对ECLIA法检测HIV抗体的影响

90例患者分为RF<18 U/mL和RF>300 U/mL两组，33例患者RF浓度<18 U/mL，ECLIA法检测出RF-IgM<18 U/mL的1例患者HIV抗体呈阳性，阳性率为3.03%；57例患者RF浓度>300 U/mL，ECLIA法检测RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗体呈阳性患者分别为11例（19.30%）、3例（5.26%），差异有统计学意义（χ2=11.0942，P<0.05）。见表2。

2.3抗CCP抗体浓度对ECLIA法检测HIV抗体的影响

90例患者分为抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组（n=39）和抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组（n=51），ECLIA法检测出抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组中HIV抗体呈阳性患者2例（5.13%），检测出抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组中HIV抗体呈阳性患者12例（23.53%），差异有统计学意义（χ2=7.2293，P<0.05）。见表3。

3讨论

艾滋病属于危害性极大的一种传染病，主要由于人体感染人类免疫缺陷病毒（HIV）产生[7-8]。HIV病毒可对人体的免疫系统进行攻击，其攻击对象为人体免疫细胞中最为重要的CD4 T淋巴细胞，HIV病毒对CD4 T淋巴细胞的大量破坏，导致人体免疫功能急剧下降，患者一旦感染HIV病毒，起初数年可能无任何表现，但若发展成为艾滋病，则会出现各种临床症状，一般初期症状多为感冒、流感、全身无力等，随着病情的不断加重，会出现皮肤、黏膜等白念球菌感染，呈现出单纯疱疹、紫斑、血疱等，此后不断侵蚀肺部、胃肠等，引起患体呼吸困难、腹泻、胸痛等症状，且还会对患体神经系统和心血管系统进行侵犯，经过长期的消耗，最终导致患者衰竭死亡[9-10]。据研究显示，HIV的变异极为迅速，且可通过血液、精液等进行传播，世界范围内由于艾滋病死亡人数近1200万人，且感染人数超过3000万人，虽全世界众多的医学研究者为研究出治疗药物付出了巨大的心血，也未生产出特异性疫苗，以至于至今无法有效进行治疗，严重威胁人类的健康[11-12]。因此在预防艾滋病中，对HIV抗体的检测尤为重要。

HIV抗体非特异反应的原因非常复杂，目前多认为与血清标本出现的溶血、类风湿因子、系统性红斑狼疮以及使用血液制品等原因相关，除了以上内、外源性干扰因素之外，其他导致HIV抗体不确定的因素报道也较多，如患者多次进行狂犬疫苗的接种会导致结果出现非特异性反应等[13]。目前将抗体检测结果的影响因素分为以下三种[14]：①患体免疫系统对HIV沉默；②患者已是HIV感染早期；③非特异性反应。类风湿关节炎（RA）属于多系统性的自身免疫疾病，类风湿因子（RF）属于一种以变性lgG为靶抗原的自身抗体，于RA患者血清及关节液中发现，该抗体属于lgM型，可与gGFc段进行有效结合，多为IgA、IgM及IgG型[15]。其中二聚体形式的IgG型可存在于滑膜液中，二聚体沉积可通过关节软骨表面对补体系统进行有效激活，从而对关节造成炎性损伤。据研究发现，多肽证实瓜氨酸残基由抗中间丝相关蛋白的cDNA序列所合成，并且在RA特异的的抗中间丝相关蛋白抗体识别表位属于必要的组成。对抗中间丝相关蛋白抗体氨基酸序列进行有效分析后，组合成为一条肽链，该肽链由瓜氨酸将精氨酸代替产生的20个左右氨基酸残基合成。通过实验表明瓜氨酸在RA患者血清中含有的抗中间丝相关蛋白相关抗体识别中属于主要组成性的抗原决定簇成分[16-17]。RA患者血清中的抗CCP抗体主要为IgG型，且属于环状聚丝蛋白中的多肽片段，在风湿性关节炎中具有较好的特异性和敏感性[18]。本研究中，根据RA患者抗体滴度分为RF<18 U/mL组、RF>300 U/mL、抗CCP抗体浓度<25 RU/mL组和抗CCP抗体浓度>500 RU/mL组，通过快速胶体金法、酶联免疫吸附法及电化学发光法对患者HIV病毒进行筛查，结果显示电化学发光法检测出呈阳性的患者高于快速胶体金法和酶联免疫吸附法，并且抗CCP抗体浓度>500 RU/mL及RF>300 U/mL标本中检测出阳性的几率高于剩下两组，本文分析假阳性的产生很可能是由试剂盒中用的酶标记抗人IgG与非特异性吸附的IgG或CCP等产生结合，从而导致假阳性的产生，同时表明高浓度的自身抗体和类风湿因子均对电化学发光法检测HIV病毒具有一定的影响，从而产生一定的假阳性。

目前HIV病毒的筛查方式多采用ELISA和胶体金法，其中ELISA具有较好的特异性和敏感性，但其操作具有需要酶标仪和洗板机等进行辅助，且具有耗时长的缺点，在检测应用中多用于大批量标本筛查；快速胶体金法操作及判定阴性和阳性的方法简单，具有较高的敏感性，但其特异性较弱，筛查中易出现假阳性[19-20]。ECLIA在筛查HIV病毒中，可同时对抗原抗体进行检测，有效缩短检查窗口期，具有自动化的特点，操作较为简洁，但具有较高的敏感性，在患有自身免疫性疾病的患者检测中，一旦患者血清中自身免疫抗体含量较高，则会导致干扰筛查，出现假阳性。本研究中，ECLIA检测HIV病毒出现12例阳性，且经后续观察并采用免疫印记确认实验，均转为阴性，提示采用ECLIA检测RA患者血清HIV病毒的实验中若出现阳性结果需慎重对待，需采用另一检测方式进行实验。由于检测结果中出现假阳性的原因较多，也表明了筛查人员在进行筛查时需非常仔细，以免出现人为干扰因素。

综上所诉，类风湿关节炎高滴度的自身抗体对ECLIA法检测患者HIV抗体具有一定的影响，可能会导致假阳性的产生，因此多钟检测方式进行筛查是有必要的，ECLIA法包被HIV-p24抗原，因此该检测方法在HIV抗体筛查中具有临床意义。

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（收稿日期：2017-08-01）