慢病毒介导的RNA干扰沉默RRS1基因对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响
2018-03-27
精准医学杂志 2018年1期
(青岛大学医学院生物化学与分子生物学系,山东 青岛 266021)
乳腺癌发病率逐年提高[1],并呈年轻化发展的趋势[2],占女性恶性肿瘤发病率的第一位,其死亡率居恶性肿瘤死亡率的第二位[3]。其治疗手段主要包括手术治疗、放化疗及内分泌治疗等。但是,乳腺癌病因多种多样,如膳食方面,高碳水化合物、高脂肪、高蛋白饮食是乳腺癌发病的高危因素,蔬菜水果等富含膳食纤维和维生素的食物是乳腺癌很好的保护因素[4-10];适当的运动也会降低乳腺癌的发病风险。近年来,乳腺癌内科治疗中的基因靶向治疗成为临床研究的热点[11]。但乳腺癌相关生物标志物和药物治疗靶点研究尚不足,需要进一步对相关因子进行探讨。本研究根据乳腺癌成对样本信息,通过高通量差异表达基因筛选和生物信息分析,成功筛选出一个新的对乳腺癌有重要作用的基因——核糖体合成调控因子RRS1(Regulator of Ribosome Synthesis 1)基因。为了解分析RRS1在乳腺癌中的作用,本实验采用慢病毒介导的RNA干扰MCF-7细胞中RRS1基因的表达,探讨此基因对MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移及周期的影响,为进一步探讨其作用机制与临床应用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
HMEC细胞(上海吉尼欧公司),MCF-7细胞(青岛大学附属医院中心实验室),胰蛋白酶-EDTA(0.53 mmol/L)消化液、RIPA蛋白提取试剂盒、DMSO、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶试剂盒、MTT及PI试剂(北京索莱宝生物科技有限公司),RNA反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒(北京全式金生物技术有限公司),辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠……
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