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高寒区牛内脏组织的采集及其RNA的贮存

2018-03-21侯明杰石福于王虎成草业科学国家级教学示范中心兰州大学甘肃兰州730020草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院甘肃兰州730020

草业科学 2018年3期

侯明杰,张 霞,石福于,王虎成(1.草业科学国家级教学示范中心(兰州大学),甘肃 兰州 730020; 2.草地农业生态系统国家重点实验室 兰州大学草地农业科技学院,甘肃 兰州 730020)

牦牛(Bosgrunniens)是青藏高原地区的特有畜种,也是“世界屋脊”著名的景观牛种,主要分布在海拔3 500 m以上的高山草原,是青藏高原牧区人民的主要生活和经济来源[1]。牦牛在高寒、缺氧和枯草期长达半年的严峻自然条件下,经过长期自然选择和自身适应已具有独特的生物学特性[2-3],科学认知并利用这一神奇的物种,研究其高寒营养适应性显得尤为必要,但因牦牛所处环境及生物习性明显不同于普通牛,传统的营养学研究方法在这一物种上的应用受到限制,研究新的方法与技术显得尤为必要。近年来,分子生物技术在动物基因的表达及调控中的应用受到广泛关注,而其研究主要建立在转录组的基础上,得到完整的RNA是试验的关键。但是,动物组织离开活体后RNA极不稳定,极易被广泛存在且难以消除的内源或外源RNA酶降解,使得高质量RNA不易获得,故合理提取并保存组织RNA 至关重要[4-5]。在试验过程中,有时由于样本量较大、提取总RNA时间较长等原因,提取总RNA后不能迅速进行后续试验, 使得提取出的总RNA必须贮存一段时间。研究发现,大鼠海马组织总RNA样品可在-70 ℃下保存60 d,反复冻融3次后总RNA质量基本不变[6];全血RNA在37 ℃保存7 d时发生明显降解[7]。然而,针对高寒区牦牛和本地黄牛总RNA长时间保存后的质量分析未见报道,这势必不利于宝贵资源的高效利用。……

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