薛清，李宁，褚恒，刘晓红，韩林，徐志云

主动脉瓣钙化性狭窄是最常见的心脏瓣膜疾病之一，也是导致老年主动脉瓣病变的主要原因［1］。近年来，随着我国人口老龄化进程加剧，主动脉瓣病变发生率呈逐年上升趋势，目前其唯一有效的治疗方法是手术［2］，而如何从发病机制着手进行干预、控制病情进展甚至逆转疾病进程是当前亟待解决的问题。近年来，有关主动脉瓣钙化的基础研究越来越多。第二军医大学附属长海医院心血管外科是全军心脏外科重点实验室，在主动脉瓣钙化相关领域研究较为深入。既往有基础研究结果显示，细胞外酸碱环境对血管平滑肌细胞、成骨细胞等细胞钙化具有明显影响［3-4］。鉴于此，本研究拟通过改变主动脉瓣膜间质细胞培养基的酸碱度来观察瓣膜间质细胞钙化情况，以明确细胞外酸碱环境对主动脉瓣膜间质细胞钙化的影响，并探讨其相关机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 主动脉瓣膜 主动脉瓣膜来源于2017年1—6月在第二军医大学附属长海医院心血管外科接受心移植手术的患者，患者均知情并签署知情同意书。取外观正常的主动脉瓣膜备用。

1.1.2 主要试剂 人Ⅱ型胶原酶（Sigma-Aldrich公司），胎牛血清（Gibco公司），DMEM培养基（Gibco公司），青霉素/链霉素双抗液（Gibco公司），0.25%胰蛋白酶（Gibco公司），鼠抗人波形蛋白（Vimentin）抗体（Santa Cruz公司），Alexa Fluor594标记的羊抗鼠免疫球蛋白G（IgG）（Santa Cruz公司），鼠抗人CD31抗体（Santa Cruz公司），Alexa Flour568标记的羊抗鼠IgG（Santa Cruz公司），β-甘油磷酸（Sigma-Aldrich公司），抗坏血酸（Sigma-Aldrich公司），地塞米松（Sigma-Aldrich公司），1 mol/L盐酸溶……