蔬菜农药残留快速检测实验室内部质量控制

2018-03-16刘召部李建平尹星懿

现代农业科技 2018年3期

刘召部++李建平++尹星懿

摘要基于部分地区极易出现的影响酶抑制率法蔬菜农药残留快速检测准确度、精密度的操作问题，阐述了包括与农产品监管追溯系统联网在内的酶抑制率法蔬菜农药残留快速检测实验室的内部质量控制，涵盖了从取样到数据上传研判全环节，以期为速测技术在一线食用农产品生产经营者与监管人员中的应用与推广提供更好的技术参考。

关键词蔬菜；农药残留；快速检测；酶抑制率法；準确性

中图分类号 S481+.8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0133-02

Abstract Many existing problems，which affect accuracy and precision in rapid detection of pesticide residues，were exposed significantly during some districts.The internal quality control of rapid detection for vegetable pesticide residues in laboratory by enzyme inhibition rate method was summarized in this paper，including the agricultural products supervision system.It covered the whole process quality control from sampling to data uploading and data analysis，so as to provide scientific support for the application and promotion of rapid detection with high sensitivity at grass root level.

Key words vegetable；pesticide residue；rapid detection；enzyme inhibition rate method；accuracy

食品安全问题不仅关系到人们的身体健康，而且随着经济发展和人民生活水平的不断提高，也越发受到舆论的普遍关注[1]。对蔬菜等农产品进行农药残留等质量安全检验检测，是加强农产品监管、保障农产品质量安全的重要技术支撑和基础，也是助力农业供给侧结构性改革持续深入推进的重要抓手。

测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的酶抑制率法自20世纪60年代问世，目前研究已相对成熟，能够对这两大类常用农药残留进行定性快速检测[2-3]，已列入国家标准GB/T5009.199—2003[4]。由于其具有操作简单、速度快、成本低等优点，已成为当前基层农产品质量安全检测机构采用频率较高的农药残留检测方法[5]。

在日常快速检测活动中，要开展有效的质量控制，保障检测结果的准确性[6]。实验室的质量控制包括室间质量评价和室内质量控制。目前，室间质量评价已在定量检测实验室中制度化、规范化、程序化应用，而在快速检测实验室中罕见应用；实验室内部质量控制可以反映检测质量的稳定性、速测的准确度及精密度，发现检测中出现的非正常问题并及时进行修正。内部质量控制的好坏，直接影响着例行速测工作，影响着农产品质量安全检验检测能力。影响内部质量控制的主要因素包括人员的控制、试剂及样品的控制、对检测仪器设备的质量控制、室内环境条件的质量控制、结果的质量控制等几个方面。

1 人员的控制

采样人员、检测人员应当积极参加上级主管部门组织的业务培训[7]，熟悉农药残留快速检测的原理、步骤、试剂的作用、仪器组装等理论知识，并能踏实做试验。已经配套了检测数据监管追溯平台的，还需要检测人员熟悉基本电脑操作，并能保持人员的相对稳定性。

2 试剂及样品的质量控制

2.1 试剂

2.1.1 试剂配制的要求。配制提取液（缓冲液）时以蒸馏水、去离子水为佳，瓶装纯净水在预试验结果乐观的条件下也可以进行推广。不允许使用矿泉水、自来水配制，以免其中的矿物离子等影响提取液的pH值。直接将粉剂倒入水中配制提取液时，室温下短时间内不易溶解，会影响反应过程中酶的活性。应先加适量的水使粉剂完全溶解，冷却后再定容至所需体积。

2.1.2 试剂保存的要求。酶抑制率法不同于速测卡法，其试验中需要用到几种试剂充分反应才能得出结果。部分试剂可以直接购买，而部分试剂需要检测人员自己动手配制，并进行恒温保存。粉剂化的酶及底物粉末应该放置于-18 ℃左右的冰箱冷冻室中冷冻保存；液态酶应置于0～4 ℃的冰箱冷藏室中恒温保存[8]。

2.1.3 防止试剂受到污染的要求。保证试剂从瓶中吸出后“只出不进”的原则。多数速测实验室由于经费限制，微量移液器（微量移液枪）的吸头（枪头）不能做到一次性使用。这更需要保证一个枪头在清洗干净前只能接触单独某一种试剂，杜绝枪头交叉使用引起试剂污染[9]。同种试剂须用一瓶开启一瓶，直到用完或试剂失效后才可以打开下一瓶。

2.2 样品

蔬菜样品的正确采集、保存和处理意义重大。样品是否合格关系到速测结果的准确性。

2.2.1 样品的采样。速测所需样品较少，一般不需要按照NY/T789—2004农药残留分析样本的采样方法进行，但所采样品依旧需要符合统计学要求的抽样方法，在尽可能符合农产品采收实际要求的情况下[10]，确保样品的代表性[11]。

从笔者的监管经验看，如果是从生产环节抽取蔬菜样品，不宜从田地的边沿抽样，以尽量杜绝其他地块种植者以喷雾、喷粉、施粒、熏烟等方法施用农药时“漂移”[12]到所抽采样品上，导致样品不具有代表性，进而影响后续跟进执法处罚；如果是从市场环节采样，散装样本应从上、中、下分层采样，包装产品采样应按堆垛采样或甩箱采样[13]。endprint

采样前均应清洗或擦拭采样工具。采样过程中应及时、准确地记录采样相关信息，做好抽样记录，并及时进行样品预处理。

2.2.2 特殊样品的处理方法。有些蔬菜中含有大量的植物次生物质，对酶的活性有直接影响，例如芹菜、葱、香菜、蒜等；有些蔬菜中叶绿素的含量很高，彼此之间产生比色反应，容易出现假阳性（本身合格而判定为不合格）；另外，蔬菜的辛辣味越浓，出现假阳性的频率越高。对于这些性质特殊的果蔬来说，最好是采用表面测定法或整体浸提法尽可能地消除干扰[14-15]。

2.2.3 样品预处理。样本按四分法缩分到适量后，保存待测。未配置不锈钢取样器的实验室，在剪切蔬菜时不宜剪切得太碎，否则比色皿中的沉渣、肉眼看不到的颗粒容易影响正常比色[14]。将样品水洗后再进行检测，同样会影响样品检测质量。

3 仪器设备的质量控制

3.1 正确使用和维护天平

天平在使用前应按说明书的要求先进行通电预热，然后才能使用。轻取托盘保护盖，将天平置于平稳无风、无震动的环境使用。放置大于标定重量的物体于托盘上可能造成传感器损坏。放置物体时应轻拿轻放，不可冲击托盘，以免损坏天平的内部零件或导致称重不准确。

部分天平工作时，不允许在其周围若干距离内使用收音机、手机或电视等移动电话、有辐射的电子产品，否则会影响精准度。

3.2 速测仪使用

使用前最好按照说明书要求进行预热，在农药残留速测仪稳定后再开展测定工作，以保证试验的可重复性。使用时应保证速测仪各个孔位内无杂物，确保光路通畅。

3.3 器皿使用原则

加各种试剂时，不同吸头（枪头）要分工明确，不可用同一器具吸取不同试剂，以免污染试剂。试管、比色皿、提取瓶等器皿每次使用后应及时清洗干净，晾干待用。比色皿上的顽固污渍可用乙醇清洗。

3.4 微量移液器（微量移液枪）的使用

在使用过程中，需慢吸慢排，吸液时使用第一档（第一个停动点），排液时使用第二档（第二个停动点）。原则上，微量移液器（微量移液枪）不应水平放置或倒置；并在每次试验结束后，将其调节到最大量程[16]。

4 实验室环境条件的质量控制

4.1 防护设施

为了保障检测人员人身安全和实验室财产安全，实验室必须完善安全防护措施，防火防电。另外，严禁在实验室进食饮料、食物或吸烟等；不得存放大量易燃试剂，并由专人进行定期检查。

4.2 温度控制

由于酶的活性受温度影响较大，因而无论是否配置恒温水浴锅、恒温箱，在昼夜温差大、冬季温度较低的地区，实验室均可设置空调机，将室温控制在20 ℃以上。室温过高或过低都会显著降低酶的活性，甚至导致失活，影响试验的正常进行。

5 结果质量控制

5.1 空白试验

在做空白对照试验时，如果仪器提示酶的活性较低，可能的原因：一是酶失活；二是反应温度较低。酶的活性下降，不利于降低催化反应的“活化能”[17]，需要重新做对照试验。

国内不同厂家生产的酶因酶源、敏感度和稳定性不同，恒温培养温度、培养时间也不尽相同，使用时应注意查看使用说明书[2]。

5.2 样品测定

加入底物和上机测试一定要迅速，并且同一批样品放入速测仪中的时间间隔尽量一致，否则仪器测试的是不同的反应时间段，这样会带来较大的誤差。3 min后便可读出试验数据（部分仪器可以在软件里调整设置，适当减少或延长放入时间）。样品培养温度和时间、放入的速度应与空白对照溶液保持相同的条件，这样速测仪基于酶抑制率计算公式进行运算后，结果才有可比性。

对照采样记录，及时将结果录入系统。带有嵌入式微型打印机的速测仪可直接打印结果，但打印出的热敏纸易褪色，需做好数据记录备份工作。

部分农残速测仪器开发公司开发了与之配套的检测数据监管平台、追溯管理系统。这种速测仪具备检测数据同步上传入库功能，避免人为修改检测结果的可能性。

6 结语

在当前农产品生产经营主体、基层检验检测机构的人力、物力、财力仍难以维护先进大型仪器长期满负荷运转的现状下，成本低、速度快、对操作人员素质要求相对较低的酶抑制率法快速检测具有定量检测方法无法比拟的优势[18]，仍然是当前乃至今后一定时期内农残检测的重要方式[19]。在这种客观情况下，更需控制好快速检测实验室的各项内部质量，并长期程序化、规范化操作，以把误差降低到最小，减少误判和漏检的几率，确保数据的准确性。发现蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50%的样品，可进行定量分析，确定具体农药品种和含量，并及时追溯处理，为农产品质量安全保驾护航。

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