吕 旭，关 明，古再丽努尔·阿尔肯

(新疆师范大学化学化工学院，新疆 乌鲁木齐市 830054)

卵磷脂(lecithin)是一种能够提供丰富营养和特定功能的含磷极性类脂合物，它与维生素、蛋白质并列誉为“第三营养素”[1-2]。卵磷脂的主要成分有磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)、磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine，PE)、磷脂酸(phosphatidic acid，PA)等[3]。著名专家Folch于1942年通过实验发现了肌醇磷脂，在已知的肌醇磷脂中磷脂酰肌醇是含量最多的[4]。磷脂酰肌醇在真核细胞中承载着许多重要的信号分子，同时在细胞膜中起着很重要的作用[5]。凭借着PI独特的乳化等特殊性能，磷脂酰肌醇在医药、食品、化妆品等行业领域中得到了广泛的应用，市场需求量逐渐增加[6-7]。除了大家所熟知的大豆、花生等农作物卵磷脂中磷脂酰肌醇含量丰富外，新疆自产的胡麻(Linumusitatissimum L)中也含有一定量的磷脂酰肌醇。

专家学者经过几十年的研究，目前对磷脂酰肌醇的测定方法有很多种。如郭勍[8]费云芸[9]等运用了薄层色谱法 (TLC)对大豆中的磷脂酰肌醇进行了定量检测；Kim,Junhwan、Hoppel,Charles L[10]采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)在大鼠心肌和骨骼肌中检测到磷脂酰肌醇等七类磷脂；高树刚等人[11]对大豆磷脂中的磷脂酰肌醇采用气相色谱法测定；李国辉等人[12]以V(乙醇)∶V(乙腈)∶V(水)=50∶40∶10为流动相，建立了高效液相色谱紫外检测器测定大豆保健品中磷脂酰肌醇等磷脂的测定方法；李志琴[13]以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(85∶15∶0.45∶0.05等为流动相，运用梯度洗脱HPLC-ELSD法测定蛋黄卵磷脂中磷脂酰肌醇等有关物质。其中高效液相色谱法具有操作简单、灵敏度高、分析测定速度较快、密闭性较好等优点，被多数学者所采用。

本文以从新疆本地自产的胡麻油中精致提炼出的胡麻卵磷脂为研究对象，采用高效液相色谱法，甲醇-乙腈-异丙醇为流动相，对胡麻卵磷脂中的磷脂酰肌醇进行测定，为今后胡麻中磷脂酰肌醇的测定提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

胡麻卵磷脂为本课题组精制，纯度≧99%，磷脂酰肌醇标准物质(纯度≥98%，购自Sigma公司)，甲醇、乙腈、异丙醇(色谱纯，均购自Sigma公司)，二次蒸馏水。

1.2 仪器与设备

Sino ChromODS-BP-C18柱(4.6mm×200mm×5μm)；Agilent 1200高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；AL-204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.3 标准溶液配制

精密称取磷脂酰肌醇标准品1mg用10 mL氯仿-甲醇(2∶1)溶解液至于标准容量瓶中溶解稀释，充分摇匀放在冰箱里冷藏，等待使用。

1.4 样品处理

精密称取胡麻卵磷脂样品15 mg放置于50mL量瓶中内，然后入三氯甲烷-甲醇(2∶1)溶解液稀释至刻度线，充分摇匀放在冰箱冷藏，等待测试。

1.5 色谱条件

色谱柱：C18，4.6 mm×200 mm×5μm；流动相：V(甲醇)∶V(异丙醇)∶V(乙腈) =37∶61∶2[14]；流速：1.0mL/min，等度洗脱；检测波长：206nm；进样体积：每次10μL；柱温：35℃。

1.6 液相色谱测定

用Agilent 1200高效液相色谱仪分别对配置好的样品溶液和标准溶液进行检测，根据磷脂酰肌醇标准溶液的保留时间，再与样品中组分的保留时间进行比较，测定其色谱峰面积的响应值，同一样品进行三次测定。

2 结果与分析

2.1 分离度和线性关系

对流动相中甲醇、异丙醇和乙腈的比例反复调试，最终发现当流动相甲醇∶异丙醇∶乙腈=37∶61∶2(体积比)时候，经过等度洗脱卵磷脂中磷脂酰肌醇成分得到了较好的分离，分离度大于1.5。运用标准品追加法和保留时间对照法可以确定磷脂酰肌醇的峰位置，磷脂酰肌醇保留时间约为2.5min 。

图1 标准品及样品色谱图

Fig.1 Chromatogram of standard product and sample

分别移取标准品溶液(浓度约为5 μg/mL、10μg/mL、15 μg/mL、20μg/mL、25 μg/mL)注入高效液相色谱仪，记录色谱图，进行浓度C(μg/mL)与峰面积A的相关性分析。根据实验结果可知：磷脂酰肌醇在5.015～25.045μg/mL浓度范围内，C与A的线性回归方程为A=1254.775C+1809.778，相关系数为0.99899，线性良好。

图2 磷脂酰肌醇标准拟合直线

Fig.2 Standard fitting line for phosphatidylinositol

2.2 精密度和重复性

取标准溶液重复进样5次，测定每一次对照品的峰面积，由实验结果计算可得出PI平均峰面积的RSD值为1.73%，精密度符合相关实验的基本要求。

2.3 样品测定

每次取胡麻卵磷脂样品10μL注入高效液相色谱仪，重复5次，得出每一次的峰面积，然后带入线性回归方程可以算出测试样品中磷脂酰肌醇的含量。根据实验结果统计分析可知磷脂酰肌醇的含量平均约占胡麻卵磷脂5.394%，含量相对较少。

表1 样品测定结果Table 1 Results of sample determination

2.4 加标回收率

取稀释后的胡麻卵磷脂样品配成1mg/mL的溶液，加入3种不同质量的磷脂酰肌醇标准溶液，按照实验步骤进行9次，测得的结果如下表2所示：

表2 回收率测定结果(PI)Table 2 Results ofrecovery tests (PI)

3 结论

建立了一种高效液相色谱与蒸发散射光检测器联用的方法，对胡麻卵磷脂中的磷脂酰肌醇进行较好的分离及定量测定。测定出胡麻卵磷脂中磷脂酰肌醇平均约占5.394%，加标平均回收率为98.58%，该方法操作简单、稳定性良好，准确度较高，可为胡麻质量评价提供科学依据。

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