齐兴财，秦晓东，甘晓丽，张淑敏，马友记，李志勇*

(1. 甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州 730070；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046)

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒感染引起(foot-and-mouth disease virus， FMDV)一种急性、高度传染性的偶蹄类动物疫病[1-3]。FMDV易染动物包括牛、猪、绵羊、山羊和超过70种的野生动物物种[4]，严重妨碍了畜牧业健康发展[5]。目前，疫苗接种被广泛用于预防FMDV感染，但由于该病毒有七个血清型，在几个血清型之间缺乏交叉保护，血清型相同的不同毒株也可能没有相互的保护作用[6]，还没有其他有效的方法来阻止口蹄疫的流行[7]。因此应该加大力度研究防控该病。

自从RNAi技术被发明以来[8]，RNAi技术被广泛的应用于抗病育种研究并且在抗病毒领域的研究中有了重大的突破，有望成为疾病预防的一种新型手段[9-11]。研究表明，利用RNAi技术靶向口蹄疫病毒的VP1、3D蛋白基因可以有效抑制FMDV在细胞内的复制，并且成功地生产了具有抗口蹄疫病毒的转基因动物[12-14]。目前利用RNAi技术靶向口蹄疫病毒的3C基因的研究比较少，本研究针对ON口蹄疫病毒的VP1、3C、3D基因，构建shRNA重组表达质粒，在细胞水平上挑选出能够高效抑制ON 口蹄疫病毒的干扰片段，并成功制备含有慢病毒干扰载体的慢病毒，为后续抗口蹄疫病毒的转基因羊生产培育奠定实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株、细胞和载体 ON 口蹄疫毒株由中国农业科学院兰州兽医研究所保存； DH5α感受态细胞购自全式金生物技术有限公司；……