, ， ，, ，，

致病性大肠杆菌是目前集约化养猪场中最为常见，也是最为严重的仔猪病原菌之一，其主要引起仔猪腹泻症状，据研究，我国每年仔猪因腹泻死亡占仔猪死亡总数的39.8%[1-2]。仔猪腹泻不仅造成仔猪生长性能缓慢而且引起仔猪生长发育停滞(即所谓的僵猪)，严重影响藏区养猪业的健康发展。近年来，随着西藏规模化养猪业的迅速发展，猪大肠杆菌病在西藏流行，猪腹泻疾病几乎遍布所有的猪场，发病率升高，给养猪业带来的经济损失越来越严重。同时，由于滥用抗生素等导致耐药性菌株的数量不断增多，加大了该病治疗难度[3-5]。

疫苗免疫接种是有效预防传染性疾病的主要手段，但西藏地区居住分散，科学教育基础差，动物疫苗接种推行和普及困难。研究西藏仔猪的肠道传染病的流行菌株，流行区域以及感染状况，针对疫苗接种过程中一般的注射免疫在藏区操作困难的问题，迫切需要探索新的疫苗和新的免疫策略，这对西藏养猪行业有非常重要的现实意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物 采集西藏某猪场死亡藏仔猪组织，装入自封袋，编号；KM小鼠购自成都达硕实验动物有限公司。

1.1.2主要试剂 普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美蓝平板、生化培养基均由西藏大学农牧学院动物科学学院高原动物疫病检测中心制备。LB培养基，卡那霉素、氯霉素等储存液由四川大学华西基础医学院与法医学院微生物学实验室制备。甘露醇购自成都科龙化工，重组质粒pET28a(+)/CTB由课题组构建,表达纯化由四川万可泰生物技术有限公司提供。……