张妍乐 顾玲 马志贵（通讯作者）

（四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室 四川 成都 610000）

急性淋巴细胞白血病（acute lymphocyte leukemia，ALL）是临床常见的血液恶性肿瘤，多发于幼儿群体，具有病情发展迅速、死亡率高等特点[1]。糖皮质激素（glucocorticoid，GC）是ALL的主要治疗手段之一，能特异性地调控细胞周期相关基因表达，阻滞恶性淋巴细胞增殖和促进其凋亡。但临床数据[2]显示，目前有超过1/4的儿童ALL患者在治疗过程中出现GC耐药性，影响其治疗。微小RNA（microRNA,miRNA）是近年来肿瘤研究的热点，被证实与肿瘤的发生发展密切相关。本研究以人急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7为研究对象，分析地塞米松诱导急性T淋巴细胞白血病细胞耐药性和miR-15b之间的关系。现具体报告如下。

1.材料与方法

1.1 材料

CEM-C7为人急性T淋巴细胞白血病GC敏感细胞株，由美国E.Brad Thompson教授（University of Texas Medical Branch）提供，胎牛血清购自Hyclon公司、RPMI-1640培养基购自Gibco公司、Trizol购自Invitrogen公司、SYBR Green荧光定量qPCR试剂盒购自日本Takara公司，地塞米松购自美国Sigma公司，Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒购自南京凯基公司，逆转录试剂盒购自日本Takara公司。

1.2 方法

取含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下常规培养、传代CEM-C7细胞。取适量对数生长期细胞，调整成2×105/ml的细胞悬液20ml。将细胞悬液充分混匀后随机分为10ml每培养瓶两组，1组加入10nmol/L地塞米松，诱导72h后获得CEM-C7耐药性细胞株CEM-C7R。另一组加入等体积无水乙醇，常规培养72h。

之后，CEM-C7R细胞株停用地塞米松，CEM-C7细胞株继续使用无水乙醇，两组细胞株均传代培养4、8、16、24周。之后均给与10nmol/L地塞米松处理，采用流式细胞仪检测凋亡情况，比较两组细胞系的相对存活率。……