谢学文 张自心 武 军 石延霞 柴阿丽 李宝聚

（中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081）

黄瓜（Cucumis sativusL.）是我国重要的蔬菜作物之一，种植面积居世界首位，且逐年增加。近几年，由多主棒孢（Corynespora cassiicola）侵染引起的黄瓜棒孢叶斑病成为危害我国黄瓜生产的重要新流行病害（李宝聚 等，2008；韩小爽 等，2011；杨双娟 等，2012），危害范围和程度甚至超过霜霉病和白粉病。该菌寄主范围广泛，能够侵染逾530种植物。国内外有关该病菌的研究主要集中在生物学特性、遗传稳定性和抗药性等方面（Dixon et al.，2009；Miyamoto et al.，2010；高苇 等，2012；李宝聚 等，2012；D é on et al.，2014），对多主棒孢致病机理及侵染途径方面研究较少。

红色荧光蛋白（red fluorescent protein，RFP）最早从印度洋-太平洋地区的珊瑚虫中分离而得，在不同温度和pH条件下具有较高的稳定性，且与其他蛋白形成的融合蛋白通常仍具有荧光，因其具有易于检测、荧光稳定、无毒害、种属通用、易于构建载体、可进行活细胞定位定时观察等特性而得到广泛关注（Lorang et al.，2001）。RFP随机插入真菌基因组中，可直观、快速、简便地动态观察真菌定殖及其与寄主的互作机制（de Silva et al.，2009），可用于检测真菌在寄主中的生长速率、研究真菌与寄主侵染互作模式等（Cormack，1998）。目前多主棒孢对黄瓜的致病机理研究还不深入，利用多主棒孢RFP标记转化株有利于直接观察病菌侵染过程，在抗病基因挖掘、致病机理分析等方面具有重要的意义。

农杆菌基因介导技术（ATMT）一直用于植物基因的转导（Tinland，1996），直到1995年，Bundock等（1995）报道ATMT技术不仅能将农杆菌的T-DNA转移到植物基因组中，也可转移到酿酒酵母基因组中，自此，ATMT技术开始应用于真菌研究（Michielse et al.，2005）。……