◎ 赵才敏，李 涛，蒋 丽，杨昌彪，李 莎，汪 勋，曹虎灵

（1.毕节市食品药品稽查局，贵州 毕节 551700；2.贵州省流通环节食品安全检验中心，贵州 贵阳 550000；3.贵州省分析测试研究院，贵州 贵阳 550000；4.毕节市食品药品检测所，贵州 毕节 551700）

Zhao Caimin1， Li Tao2， Jiang Li1， Yang Changbiao3， Li Sha4， Wang Xun4， Cao Huling4

(1.Bijie Food and Drug Inspectorate， Bijie 551700， China；2.Guizhou Food Safety Inspection Center for Circulation， GuiYang 550000， China；3.Guizhou Provincial Institute of Analysis and Testing， GuiYang 550000， China；4.Bijie Food and Drug Testing Institute， Bijie 551700， China)

盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB），俗名瘦肉精，属于β-肾上腺受体兴奋剂[1]，因其能加强脂肪分解促进蛋白质合成加快畜禽增长速度[2]，曾被用做养殖促进剂[3]，对人体有蓄积性毒性，临床中毒表现为心动过速、低血钾、肌肉震颤等，我国已于1997年严令禁止使用[4]。本研究选取3种市售同批次盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒（D、M、A），引入金标读数仪作为仪器确证[5-6]，对其最小检出浓度、特异性、假阳性率、假阴性率等方面进行研究[7-9]，通过分析3种市售同批次盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测产品（试剂盒）对盐酸克伦特罗标准溶液和阴性猪肉加标样本的快速检测结果，比较3种市售盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒的质量，筛选出质量优异的盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒，用于畜禽肉屠宰点和农贸市场猪肉中的盐酸克伦特罗检测。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

天平（感量0.01 g、0.000 1 g），恒温水浴锅，15 mL离心管，移液枪（量程1 000μL、200 μL），智云达CGT-3100胶体金读卡仪，安捷伦高效液相色谱-串联质谱联用仪[配有电喷雾离子源（ESI）]，计时器，室温温度计，台式低速离心机，超低温冰柜，智云达CGT-3100胶体金读卡仪，盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒：品牌D检出限0.5 ng·g-1，品牌M检出限 3 ng·g-1，品牌 A 检出限 3 ng·g-1。

1.2 实验方法

1.2.1 阴性样品制备

取经GB/T 22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》检测盐酸克伦特罗未检出的阴性猪肉样品，去皮去脂肪，粉碎，冷冻保存待用。

1.2.2 盐酸克伦特罗标准溶液配制及检测

用烘干冷却的干净烧杯称取盐酸克伦特罗标准物质，超纯水稀释定容，配制成盐酸克伦特罗标准溶液系列梯度[10]，用安捷伦高效液相色谱-串联质谱联用仪按照GB/T 22286-2008方法测定（平行测定3次），同时用D、M、A 3种盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡进行检测（平行测定6次），记录结果后立即用金标读数仪对3种检测卡进行检测。

1.2.3 阴性猪肉样品加标检测

按照快检产品说明书，随机选取阴性猪肉样品12批次，按照3种试剂盒产品说明书称样于15 mL离心管中，每批次猪肉按照每个产品说明书称样4个，分为D，M、A 3组，共144个样品，加入一定量事先配制好的盐酸克伦特罗标准溶液（超纯水介质），使样品中所含标准物质浓度为快检产品检出限的0倍、0.5倍、1倍、2倍，按照产品说明书进行样品前处理，检测卡检测并记录后，立即用金标读数仪对检测卡进行检测（经检测卡检测肉眼判定为无效反应时，不进行金标读数仪检测，每张检测卡金标仪平行检测2次）。

1.2.4 D产品空白检测

对3种试剂盒中检出限最小的D产品进行阴性空白标准溶液（纯水）和阴性空白猪肉检测，按照D产品的产品说明书进行样品前处理后检测卡检测，记录数据后立即用金标读数仪对检测卡进行检测（每张检测卡金标仪平行检测2次）。

2 检测结果

2.1 盐酸克伦特罗标准溶液检测结果

3种盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡测定结果和金标读数仪测定结果见表1和表2。为了避免肉眼对检测结果的判读所带来的主观误差，故使用金标读数仪对检测卡上T线、C线进行光度检测以确证。

表1 盐酸克伦特罗标准溶液测定结果判定表（根据产品说明书肉眼判定）

表2 盐酸克伦特罗标准溶液测定结果判定表（根据金标读数仪判定）

2.2 阴性猪肉样品加标样测定结果

12批次阴性猪肉样品加标检测结果见表3。

表3 12批次阴性猪肉样品加标检测结果表

2.3 D产品空白检测结果

D产品检测空白盐酸克伦特罗标准溶液阴性检出率100%，假阳性率0%；D产品对20批次阴性猪肉样品进行检测，阴性检出率100%，假阳性率0%。金标读数仪检测结果与D产品检测卡肉眼判定结果100%一致。

3 分析与讨论

猪肉检测结果的假阴性率是由0.5倍检出限、1倍检出限、2倍检出限检出阴性结果占总阳性检品的百分比表示，盐酸克伦特罗标准检测溶液的假阴性率是由最小检出浓度的阴性检出率表示，无效反应不计入总数只用于计算无效反应发生率，假阴性率+阳性检出率=1，检出阴性结果的阴性样品数占总阴性样品数的百分比即为特异性即阴性检出率，最小检出浓度即盐酸克伦特罗快速检测产品检出阳性的最小浓度。对盐酸克伦特罗标准溶液测定结果和阴性猪肉加标样测定结果进行分析比较，结果见表4。

表4 盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测产品性能分析表

3.1 比较3种盐酸克伦特罗胶体金免疫层析产品性能

如不考虑最小检出浓度，D和M产品的检测卡各项指标都最优，若考虑最小检出浓度，则D产品检测卡最优，其检出限与GB/T 22286-2008方法检出限都是0.5 μg·kg-1，用于检测禁用物质盐酸克伦特罗最科学合理。

3.2 3种盐酸克伦特罗检测产品在猪肉中的应用

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比较特异性、阳性检出率、假阳性率、阴性检出率、假阴性率可知，M盐酸克伦特罗胶体金免疫层析产品的综合性能最优。

3.3 金标读数仪的辅助使用

金标读数仪的辅助使用，降低了M、A检测卡的最小检出浓度，但却提高了产品D的最小检出浓度。主要原因是D、M、A对检测结果的判定标准不同：M、A产品阳性判定标准是消线法，即检测线T线不显色，质控线C显色；D产品阳性判定标准是比色法，T比C色浅或T不显色。在实验中，M、A检测卡盐酸克伦特罗标准溶液或者阴性猪肉加标样均有出现反应T比C色浅的情形，因此使用消线法来进行结果判定不符合实际情况和使用需要。

实验说明，M、A的产品检测结果判定标准没有D产品的判定标准优异，金标读数仪的使用可以降低M、A的最小检出浓度，可以避免D产品检测出现假阳性。

3.4 3种产品在盐酸克伦特罗标准溶液和猪肉样品中的检测结果

分析阳性检出率和无效反应发生率可知，猪肉样品基质对实验存在一定的影响。