徐小艳,陈昌海,徐正军,王相子,开 妍

(江苏省动物疫病预防控制中心,江苏 南京 210036)

兽医系统实验室是指隶属于各级兽医主管部门,并承担动物疫病诊断、监测和检测等任务的国家级区域兽医实验室、省级兽医实验室、地(市)级兽医实验室和县(市)级兽医实验室[1]。2017年7月,根据农业部办公厅和江苏省农业委员会有关兽医系统实验室检测能力比对的文件要求,江苏省动物疫病预防控制中心组织实施了2017年度江苏省兽医系统实验室检测能力比对。为更好地发挥比对结果的作用,我们对此次比对结果进行了总结和分析,旨在为今后的相关工作提供参考,为全省兽医系统检测能力提升作出贡献。

1 材料与方法

1.1 比对项目根据市级和县级实验室检测能力的不同,本次比对设置了市级比对项目和县级比对项目两大类。市级设置了高致病性猪蓝耳病病毒检测、布鲁菌病抗体检测、小反刍兽疫抗体检测、细菌分离与鉴定4个项目;县级设置了小反刍兽疫抗体检测、布鲁菌病抗体检测、细菌分离与鉴定3个项目。

1.2 比对方法、标准和试剂针对4个比对项目,明确了各自的检测方法,采用国家标准或农业部推荐的方法进行比对。所用试剂一部分由省动物疫病预防控制中心统一提供,一部分由参加比对的实验室自行准备。各比对项目所采用的方法、标准和主要试剂见表1。

1.3 比对样品制备由省动物疫病预防控制中心完成所有比对项目样品的制备、标定、分装和编号。

1.3.1 高致病性猪蓝耳病病毒检测样品参考值为强阳性、弱阳性和阴性的高致病性猪蓝耳病疫苗稀释物样品中随机抽取5份组成1组样品。

1.3.2 布鲁菌病抗体检测样品参考值为＜1∶25(记作 ＜25)或 1∶25(记作 25)、1∶50(记作 50)、1∶100(记作100)、＞1∶200(记作＞200)的羊血清样品中随机抽取5份组成1组样品。

1.3.3 小反刍兽疫抗体检测样品参考值为阳性和阴性的羊血清样品中随机抽取5份组成1组样品。

1.3.4 细菌分离与鉴定样品参考值为乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的细菌培养物样品中随机抽取3份组成1组样品。

1.4 比对样品传递比对样品为具有生物学活性的血清或疫苗稀释物,为保持其良好的生物学活性,样品冷冻保存。分发时将样品用装有冰袋的保温箱运送,由13个市级实验室派专人在规定的时间内统一领取本市所有样品和试剂,并在当日分发到辖区内各个实验室。

1.5 结果评判标准

1.5.1 高致病性猪蓝耳病病毒检测强阳性和弱阳性样品的检测结果应为“阳性”;阴性样品的检测结果应为“阴性”。

1.5.2 布鲁菌病抗体检测结果与参考值一致,判为结果正确,否则判为错误。

1.5.3 小反刍兽疫抗体检测阳性样品的检测结果应为“阳性”;阴性样品的检测结果应为“阴性”。

1.5.4 细菌分离与鉴定乙型副伤寒沙门菌的鉴定结果还可为“沙门菌”或“副伤寒沙门菌”;金黄色葡萄球菌的鉴定结果还可为“葡萄球菌”;铜绿假单胞菌的鉴定结果还可为“绿脓杆菌”;“枯草芽孢杆菌”的鉴定结果还可为“芽孢杆菌”或“枯草杆菌”,大肠埃希菌的鉴定结果还可为“埃希大肠杆菌”或“大肠杆菌”。

2 结果

2.1 总体结果根据比对结果评判标准,在13个市级、75个县级实验室中,有6个市级和28个县级实验室所有比对项目检测结果全部正确,其余7个市级和47个县级实验室部分比对项目检测值存在较大偏差;整体样品正确率87.99%,实验室正确率78.34%,见表 2。

表1 比对项目的方法、标准和主要试剂

表2 实验室比对结果统计

2.2 高致病性猪蓝耳病病毒检测比对结果本项目比对采用荧光RT-PCR方法检测高致病性猪蓝耳病疫苗稀释物样品5份,13个市级实验室检测结果全部正确,样品正确率100%,实验室正确率100%,说明各市级实验室在荧光RT-PCR检测技术方面较为熟练。

2.3 布鲁菌病抗体检测比对结果本项目比对采用试管凝集试验检测羊血清样品5份。13个市级实验室中,6个实验室检测结果全部正确,另7个实验室的检测结果存在不同程度的偏差;75个县级实验室中,36个实验室检测结果全部正确,另39个实验室的检测结果存在不同程度的偏差;样品正确率74.32%,实验室正确率47.73%。检测结果出现较多偏差的是参考值为1∶50和1∶100的中间稀释度样品。个别县级实验室结果表述格式错误,只报送了定性结果(阳性或阴性),未报送定量结果。结果见表3。

表3 各实验室布鲁菌病抗体检测结果频次与参考值对照

2.4 小反刍兽疫抗体检测比对结果本项目比对采用ELISA方法检测羊血清样品5份。13个市级实验室检测结果全部正确;75个县级实验室中,73个实验室检测结果全部正确,另2个实验室的检测结果存在不同程度的偏差;样品正确率98.64%,实验室正确率97.73%。结果见表4。

表4 各实验室小反刍兽疫抗体检测结果频次与参考值对照

2.5 细菌分离与鉴定比对结果本项目比对采用细菌分离培养、染色镜检、生化鉴定等方法检测细菌培养物3份。13个市级实验室检测结果全部正确;75个县级实验室中,63个实验室检测结果全部正确,另12个实验室的检测结果存在不同程度的偏差;样品正确率95.08%,实验室正确率86.36%。检测值出现较多偏差的是参考值为枯草芽孢杆菌的样品。个别县级实验室还鉴定出除了参考值中5种细菌以外的其他种属细菌。结果见表5。

3 讨论

从比对结果来看,整体样品正确率87.99%,实验室正确率78.34%,说明各级实验室对自身质量管理较为重视,检测能力与技术水平较高,结果较好。同时,仍有部分实验室部分比对项目检测值存在较大偏差,说明这些实验室的质量控制和检测能力水平仍有待持续改善和提高。

表5 各实验室细菌分离与鉴定检测结果频次与参考值对照

本次比对涉及4种检测方法,分别为荧光RTPCR、ELISA、细菌分离与鉴定和试管凝集试验。其样品正确率分别为：100.00%、98.64%、95.08%和74.32%;实验室正确率分别为：100.00%、97.73%、86.36%和47.73%。4种方法中,定性的荧光RTPCR方法的样品正确率和实验室正确率最高,均为100%,其次为定性的ELISA及细菌分离与鉴定,最低的是半定量的试管凝集试验,说明半定量的血清学检测项目,其难度和要求远大于定性的分子生物学和血清学检测方法[2-3]。

按市级和县级实验室两类进行分类统计,市级实验室样品正确率93.16%,实验室正确率86.54%;县级实验室样品正确率86.77%,实验室正确率76.44%。结果表明,市级实验室整体检测能力显著高于县级。但县级实验室数量多,与养殖场户联系紧密,其检测能力高低对动物疫病监测体系整体水平起决定性作用,是今后很长一段时间内需要着重加强和提高的关键环节所在。

按13个市进行分类统计,各市样品正确率和实验室正确率高低不一(图1)。常州市、苏州市所辖各个实验室所有检测项目均正确,宿迁市、南京市正确率较高,淮安市的样品正确率和实验室正确率均最低,说明各市的综合检测能力参差不齐。

图1 各市样品正确率和实验室正确率

分析比对结果还发现,在出现较大偏差的布鲁菌病抗体检测项目中,各市的样品正确率与市本级的样品正确率密切相关(图2),二者呈现相似的变化趋势,市本级样品正确率高,全市的样品正确率也较高;市本级样品正确率低,全市的样品正确率也偏低,说明市本级实验室的检测能力在全市整体检测水平中发挥关键性作用。这也提示我们应加强对市本级实验室的检测技术培训,并通过市级实验室进一步向县级实验室延伸。

图2 布鲁菌病抗体检测项目各市与市本级样品正确率

为进一步有效提升兽医系统实验室检测能力,应加强以下几项工作：一是加强对兽医技术人员的培训。注重实验室质量管理、生物安全管理以及各类常见检测技术和检测结果分析与利用等方面的培训工作,保证人员技术和能力;二是加强实验室设施设备和硬件投入。只有把实验室环境和硬件条件控制在满足试验条件的前提下,才能得出准确科学的检测结果;三是加强实验室管理。仍有少数实验室对实验室设备、样品、环境、方法、试剂、报告、人员培训与考核等严重影响检测结果准确性的关键环节管理不到位、不规范,需要加强培训和指导,督促其改善和提高。