余 蕊,马文杰,高 尚,张清一,鞠辉明,杨跃飞,王彦红

(1.扬州大学兽医学院,江苏 扬州 225009;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏 扬州 225009)

大肠杆菌是临床上细菌性疾病的常见病原,具有较高的发病率和死亡率,给畜牧业带来了巨大的经济损失。因其复杂的血清型,导致现在还没有确切的疫苗可以对大肠杆菌病进行预防,目前主要靠抗菌药物对该病进行控制。随着β-内酰胺类的抗菌药在养殖业的广泛应用,耐药菌株的出现频率也在逐年增长,β-内酰胺酶的产生是细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要机制[1]。根据基因型的不同,可以将 β-内酰胺酶大致分为 SHV、TEM、CTX-M、OXA和其他型5种型,其中CTX-M型根据基因序列同源性大于95%被分为5个组群,分别为CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群。CTX-M-1群有：CTX-M-1、CTX-M-3、CTX-M-79,等;CTX-M-2 群有 CTX-M-2、CTX-M-4、CTXM-4L,等;CTX-M-9 群有 CTX-M-9、CTXM-14、CTX-M-125,等。随着抗菌药不断地更新换代,CTX-M型的β-内酰胺酶的氨基酸残基不断发生突变,直接影响着酶对抗生素的耐药性[3]。为了解大肠杆菌的耐药情况及β-内酰胺酶的基因型分布现状,我们对5月份门诊送检病科进行了大肠杆菌分离、药敏试验和SHV、TEM、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群基因检测。

1 材料与方法

1.1 病例来源 采集2017年5月扬州大学动物医院畜禽门诊送检病例,这些病例气囊炎、心包炎、肝周炎等病变特征。

1.2 药品与试剂 药敏纸片,TaKaRa LA Taq酶,dNTP Mixture,10X LA PCR BufferⅡ(Mg2+plus),100 bp DNA Ladder,Super GelRed 10 000 Xin Water,10x Ladder Buffer。

1.3 细菌分离 采集的病料接种于麦康凯培养基,37℃培养24 h,挑选单个菌落接种于麦康凯培养基上纯化,并进行生化鉴定。

1.4 药敏试验 采用纸片法分别确认50株分离菌对于复方新诺明、氯霉素、氟苯尼考、链霉素、新霉素、诺氟沙星、庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢曲松、多西环素、左氧氟沙星、多黏菌素、妥布霉素、美洛西林、卡那霉素15种药物的耐药情况。……