潘永娜

（辽宁省大连市普兰店区动物疫病预防控制中心，辽宁 大连 116200）

兽医实验室中，常利用琼脂凝胶免疫扩散试验对马传染性贫血病进行诊断和检疫。

1 定义与原理

将可溶性抗原与相应的抗体混合，当两者的比例合适，并有盐类存在时，即有沉淀物出现，这种现象叫做沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原，与沉淀原起反应的抗体叫沉淀素。

主要是采用双向双扩散试验，即用已知抗原、阳性血清、待检血清在琼脂凝胶中进行免疫双扩散，室温下作用24小时，当已知抗原和阳性血清间出现明显沉淀线，抗原和待检血清间也出现沉淀线且与阳性血清沉淀线相连，表明待检血清中有相应抗体。

2 操作细节

2.1 试 剂

（1）标准阳性血清、标准阴性血清、琼脂扩散抗原：指定生物制品厂购买

（2）受检血清：采血分离血清，4℃冷藏保存不含防腐剂和抗凝剂

（3）琼脂糖、硫柳汞：分析纯

（4）pH7.4 0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）

2.2 器械和设备

（1）培养箱

（2）平皿：规格直径90mm，洁净灭菌

（3）打孔器：七孔梅花形、孔径约5mm，孔距为3mm

（4）分析天平

（5）微量移液器及吸头

（6）三角烧瓶

（7）酒精灯

2.3 操作步骤（方法）

（1）凝胶的配制：取琼脂糖1.0g，直接加入含有0.1‰硫柳汞的100mL的PBS中，用热水浴溶化混匀。

（2）制板（浇板）：将平皿放在水平台上，每平皿倒入热溶化的琼脂液15～18mL，厚度约2.5mm左右,自然冷却。

（3）打孔 ：在琼脂板上选好位置，用打孔器打孔。用直径3mm打孔器，孔间距为5mm。

（4）挑孔：挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。

（5）封底：为防止渗漏，将打孔后的琼脂板在酒精灯火焰上方快速来回5～7次加热封底。……