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寄生虫病LAMP技术研究进展

2018-02-13阚珍珍李文超顾有方

畜牧兽医科技信息 2018年9期
关键词:检测方法

李 慧,陈 苗,唐 莉,阚珍珍,李文超,顾有方

(安徽科技学院动物科学学院,安徽 凤阳 233100)

近年来随着分子生物学技术的发展,新的核酸扩增技术不断涌现。环介导等温扩增技术,简称LAMP是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。该技术在1h内能扩增出109靶序列拷贝,扩增产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰莱样结构的DNA片段的混合物,电泳后在凝胶上显现出由不同大小的区带组成的阶梯式图谱LAMP等温扩增反应体系包含了内外引物、模板DNA、Bst DNA聚合酶、dNTP和缓冲液。其基本操作过程是将LAMP反应体系 (除 Bst DNA聚合酶)在95℃加热5min后,冷却,再加入8U Bst DNA聚合酶,在63%保温60min,然后在高于80℃的温度下加温2min终止反应。LAMP与以往的核酸扩增方法相比,具有操作简单,快速高效、高特异性、高灵敏度等优点。

寄生虫病在人类传染病中有着非常重要的影响。及时有效的寄生虫病诊断是疾病防治的首要环节。寄生虫病检测手段有病原学、免疫学和分子生物学等。病原学检查是常用的确诊方法,但易导致漏诊或误诊。免疫学检测在敏感性、特异性方面比病原学法有所提高,但却存在交叉反应、不能区分现症患者或既往感染等问题。分子生物学方法在寄生虫病检测中敏感性和特异性比前两者更高,同时也存在着一些不足,如操作繁琐、仪器昂贵、扩增耗时等。因此,迫切需要一种敏感性和特异性高、操作简便快速的方法用于寄生虫感染检测。……

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