温 蕾，陈肇源，陈桂霞，袁镜乐

（1.东莞市厚街镇农业技术服务中心，广东 东莞 523960；2.东莞市万江农业技术服务中心，广东 东莞 523050）

随着兽医临床诊断技术快速发展，动物传染病的诊断经常采用准确快速的PCR、荧光PCR等分子生物学方法、血清学检测方法等；但是，若想更直观详细地了解病理、确定病情发展进程，组织切片技术往往是必不可少的。根据不同的制作工艺，组织切片技术可分为石蜡切片和冰冻切；其中石蜡切片具有直观性、可保存时间长、成本低廉、运用范围广等优点，在疾病诊断、病理学研究等方面的运用尤其成熟，是兽医诊断中是最权威的诊断方法之一。因此，本文将对石蜡切片的制作及其免疫荧光染色技术作一简要概述。

1 制作石蜡切片

石蜡切片，将获得的新鲜动物组织迅速经二甲苯固定，经过脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片等步骤以获得5～10μm的组织薄片，后经苏木精染色、HE染色、免疫组化和免疫荧光染色等方法，获得相应数据。

1.1 固 定 根据组织的特点将其纵切成小块，使被检测部位包含在组织块之中。4%多聚甲醛固定，放置水平摇床慢摇24h。

1.2 脱 水 自来水洗涤3次，0.5h；30%、50%、75%、85%及95%乙醇溶液逐级脱水0.5h；最后无水乙醇脱水3次，共3h。

1.3 透 明 二甲苯与无水乙醇1：1，15min；二甲苯，10～15min；二甲苯 10～15min。

1.4 浸 蜡 已经透明的组织块浸入石蜡，1h；纯石蜡，2h～4h。

1.5 包 埋 （1）将组织块切面朝下，平放入手工小纸盒，加满石蜡进行包埋；（2）再将纸盒放在冰水中冷却以促进蜡块凝固；（3）包埋好的组织块室温或4℃保存半年以上。

1.6 其他步骤 冷却好的蜡块最后通过切片、展片、捞片、烤片的步骤得到5～10μm厚度的切片标本放入37℃烘箱内保存，用于后期染色和免疫组化等检测。……