赵雪晴，李　全，钱世宁，李鹏飞△

(1.江苏省南京市妇幼保健医院　210029；2.江苏省中医院，南京 210029)

抗癌药物5-氟尿嘧啶(5-FU)是肿瘤患者化疗药物中普遍使用的。但是，5-FU在患者身上的疗效及毒性有显著差异，尤其是在毒性方面不同个体差异较大，严重情况会出现致死性的腹泻、骨髓抑制等[1-2]。机体内的5-FU有80%～85%经过肝脏的二氢嘧啶脱氢酶(DPD)代谢成为无活性成分排出体外[2]。研究表明5-FU的不良反应与其代谢和清除的限速酶DPD活性密切相关[3]。随着分子诊断技术的迅速发展，对参与5-FU分解代谢的DPD编码基因的重要位点进行测序，寻找出能够指导临床化疗的关键突变，为5-FU个体化用药提供科学依据。本研究拟检测使用5-FU化疗的患者外周血单个核细胞DPD基因表达水平及突变情况，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2015年2月至2016年6月在江苏省中医院肿瘤科住院的50例直肠癌患者，经病理证实为结直肠癌，治疗均使用5-FU，其中化疗敏感组22例，男14例、女8例，中位年龄63.2岁；化疗耐药组28例，男18例、女10例，中位年龄62.1岁。两组患者的年龄和性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有受试者均签署临床试验知情同意书。

1.2方法

1.2.1外周血单个核细胞分离按照说明书采用Ficoll分离液分离所有患者外周血单个核细胞。

1.2.2实时定量PCR检测DPD mRNA的表达采用Trizol 法提取总RNA，使用Eppendorf核酸蛋白检测仪测定RNA水平，随后反转录成cDNA。mRNA反转录反应体系(20 μL):5×PrimescriptTM缓冲液4 μL，PrimescriptTMRT Enzyme Mix Ⅰ 1 μL，Oligo dT Primer 1 μL，Random 6 mers 4 μL，RNase Free H2O 10 μL。反转录反应条件:37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min，4 ℃ 5 min。使用TaKaRa公司荧光定量检测试剂盒，按照试剂说明书进行实时定量PCR。P……