杨建珍 ，康冬柳 ，胡爱明 ，刘建林 ，邹盼 ，谢美静 ，夏璇 ，肖鑫

（1.新干县畜牧兽医局，江西吉安331300；2.吉安市畜牧兽医局；3.青原区畜牧兽医局；4.吉安县梅塘畜牧兽医站；5.泰和县畜牧兽医局；6.青原区富田畜牧兽医站；7.青原区天玉畜牧兽医站）

血凝抑制试验（HI）是基层兽医实验室常用的检测禽流感及新城疫抗体效价的试验方法，步骤简单，但在操作中由于一些细节把控不到位，经常出现试验失败或结果判定不准确的问题。笔者就血凝抑制试验中常出现的问题总结如下。

1 基本操作步骤

血凝抑制试验（HI）常分为三个阶段来完成，一是准备阶段，主要是准备PBS液、阿氏液及1%鸡红细胞悬液；二是血凝试验（HA）阶段，主要是配制4单位抗原；三是血凝抑制试验（HI）阶段，主要是测定样本的抗体效价。

2 各阶段常出现的问题

2.1 准备阶段

准备阶段易出现的问题集中在反应板的选择、阿氏液的配制、公鸡的来源、血细胞的洗涤、配制等方面。

2.1.1V型微量反应板。由于基层实验室试验中多采用一次性反应板来完成试验，省去了洗涤重复利用的麻烦，在V型板的选择中经常不注意底部的角度要求为90°，而选用110°的反应板；有些板由于挤压等原因，角度已变形不符合实验要求，造成在4单位抗原的判定及血凝抑制的结果判定中出现偏差。

2.1.2PBS液及阿氏液的配制。常见的问题是未进行pH值调定。为省事，多数地方PBS液采用生理盐水代替，阿氏液采用医用抗凝采血管代替，但常见的问题是人用采血管中抗凝剂量过少，在公鸡采血中易出现红细胞凝集，造成红细胞悬液的配制中红细胞质量不高。

2.1.31%鸡红细胞悬液的配制。最易出现的问题是红细胞的洗涤中白细胞、血小板等吸取不彻底，或多管红细胞集中为一管后，进行洗涤的时间及次数过少，洗涤离心后上清液还未呈清亮、仍有红黄色时就进行配制了。另外供采血公鸡的免疫状况不清，有可能免疫过禽流感或新城疫等疫苗；或者配好的红细胞悬液放置时间过长出现变质、溶血等，均可造成红细胞悬液失效。

2.2 血凝试验（HA）阶段

血凝试验中常见的问题有：①反应板选择不当，未选取90°的反应板来完成试验；②倍比稀释中吸液不一致造成稀释倍数偏差；③样品稀释中未每个样品更换一个吸头；④倍比稀释后未每孔再加一次PBS液（或生理盐水）；⑤加入红细胞时未随时振摇，加入红细胞后未进行消泡和振匀操作；⑥反应时间及反应温度未按操作控制，特别易出现反应温度低而过早判定结果的现象；⑦结果判断中未倾斜，或对沉淀及凝集的把握不到位；⑧配制的4u抗原或红细胞放置时间长，出现失效、变质。

2.3 血凝抑制试验（HI）阶段

血凝抑制试验阶段与HA阶段试验步骤基本一致，常见的问题也基本类似，除④中在倍比稀释完成后加入的是4u抗原，需要在室温下反应30min左右外，有时也可能出现抗原抗体反应时间不够的问题。

2.4 其它问题

另外还有几个常见的问题：①没有设定阴、阳性对照组；②记录不规范。相关的编号、结果、试剂名称和批号、样品的来源及时间等内容记录不清，甚至有些结果都未记录检测的项目，造成H5、H7、新城疫等混淆。

3 解决方案

血凝抑制试验是基层兽医实验室常做的试验，为避免试验结果的偏差，确保试验顺利完成，首先必须加强兽医实验室人员的培训，不仅要教会基本操作，还特别要从易出现问题的环节及细节处进行把控，尽量按规范操作；其次兽医实验室操作人员要有细心、有耐心、有上进心，严格按操作步骤进行试验，发现问题及时纠正，找出问题的原因，防止下次再犯；再次是要加强基层实验室建设和保障，确保有开展试验的必备条件和设备，如空调、恒温箱、振荡器、精准的移液器、吸头等；同时要保障实验室人员的应有待遇，让兽医实验室人员沉得下、呆得住、专心做。