赵方方, 刘 洋, 井乐刚, 尹悦佳 , 冯树丹*, 刘相国*

1.哈尔滨师范大学生命科学与技术学院, 哈尔滨 150025; 2.吉林省农业科学院农业生物技术研究所, 吉林省农业生物技术重点实验室, 长春 130033

由于BT蛋白具有广谱杀虫效果，因此能够代替化学杀虫剂在农田中广泛应用[1]。但是在BT生物杀虫剂的使用过程中，科学家们发现部分昆虫对原有的BT蛋白产生了抗性[2]。因此发现新的抗虫基因对于扩大抗虫谱和增加杀虫效果具有重要作用。

利用新的抗虫基因得到的转基因抗虫作物需要进行安全性评价。根据《转基因植物安全评价指南》对于转基因植物新表达蛋白食用安全性评价的规定，若用体外表达的蛋白质作为安全性评价的实验材料，需提供体外表达蛋白质与植物中新表达蛋白质等同性分析的资料[3]。在安全评价过程中，需要提供大量外源蛋白，而转基因作物本身产生的外源蛋白一般含量很低，而且难以富集和纯化，无法满足实验需要[4]，经常需要通过原核生物或真核生物等体外表达系统来诱导表达外源基因所编码的蛋白。本实验所用的基因cryNGC是吉林省农业科学院农业生物技术研究所开发的具有自主知识产权的抗虫基因(专利号：CN104725516 A)[5]。本研究利用大肠杆菌表达系统成功表达了CryNGc抗虫蛋白，并且利用His标签纯化了该蛋白；通过SDS-PAGE、Western Blot、质谱分析对抗虫蛋白CryNGc与理论表达蛋白进行了等同性分析。CryNGc蛋白的等同性研究可以为今后该转基因作物的环境释放提供理论基础。……