鲁 念, 刘兴健, 胡小元, 李轶女, 易咏竹, 张志芳*

1.中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081; 2.中国农业科学院蚕业研究所, 江苏 镇江 212018

腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)是无包膜的单链DNA(single-strand DNA，ssDNA)病毒，直径为18～25 nm。到目前为止，研究人员发现其至少有120种新血清型，其中，已经从人类和灵长类中分离鉴定到的血清型有12种[1]。

AAV主要由反向末端重复序列(inverted terminal repeat sequences，ITRs)、复制基因(rep)和衣壳基因(cap)3个结构基因构成。ITRs折叠形成发卡结构，是AAV复制、包装、整合所需的唯一的顺式作用元件，在病毒粒子转染细胞时可能起到稳定病毒基因组的作用；rep编码的蛋白质可将AAV基因组从宿主染色体上切割下来，并调节基因组的复制、整合和包装；而cap编码的3个衣壳蛋白(VP1、VP2和VP3)[2]可自组装成无包膜的二十面体病毒衣壳。

AAV最早于19世纪60年代从腺病毒中被分离出来，并通过血清学等分析方法将其归纳到细小病毒科(Prvovirdae)依赖病毒属(Dependovirus)。1984年，作为病毒载体， AAV首次被用于哺乳动物细胞中表达外源基因[3]。因为AAV具有安全性高(至今未发现其对人具有致病作用)、特异性强(有数十种血清型，不同血清型对不同器官具有特异识别感染能力)、扩散性强(具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性)、免疫原性低(感染不同组织时几乎不会被免疫系统清除)、感染谱广(可感染分裂期和静止期的细胞)等优点[4]，使其逐渐成为基因治疗中最常用的病毒载体。

AAV包装一般是在人源或哺乳动物来源的细胞以及昆虫细胞中实现的[5]。如在人胚胎肾细胞(HEK293T)中，先将含有rep、cap基因的质粒pHelper和含有目的基因的质粒pAAV转染进入细胞，再通过辅助病毒诱导得到目的rAAV。……