王树巍，任君刚 ,赵 贺

(1.哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨 150076; 2.哈尔滨商业大学 药学院，哈尔滨 150076)

丹参又名赤参，唇形科植物，产地广阔，丹参是我国应用最广泛的药用植物之一，丹参颗粒剂具有活血化瘀，理气止痛的作用，主要用于冠心病、心绞痛、高血脂及心脑血管循环功能障碍引起的头痛、心肌缺血、记忆力减退等症.颗粒剂是指与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状的制剂[1-5].颗粒剂与其他剂型相比，颗粒剂有许多特点，颗粒剂可分散在水和其他适宜的液体中服用，也可直接吞服[6].颗粒剂有不同的分类，有泡腾式颗粒剂、可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂，各类型各有优点[7-9].颗粒剂与散剂相比，颗粒剂有许多特点：飞散性、附着性、聚集性、吸湿性、等[10-11]；但颗粒剂由于粒子大小不一，在用容量法分剂量时不易准确，且几种密度不同及数量不同的颗粒相混合是容易发生分层现象[12-14].丹参颗粒剂对多种疾病有治疗作用，例如：其对实验性缺血心肌有保护作用，并且对凝血系统也有保护作用，丹参颗粒剂可以定向的作用于某一部位，增强药物的作用[15].丹参颗粒剂有利于丹参的有效成分在人体机体内的吸收分布及代谢排除，丹参的质量检查对其也有重要意义，丹参颗粒剂要严格按照质量标准进行质量比测定，质量检查对其颗粒剂的制备是否合格具有重要意义[16].中药制剂是中药中非常重要的组成部分，随着古今剂型的演变、形成和发展，以及社会的进步，科学技术的发展，中药颗粒剂已发挥了它无可替代的作用.

1 材料

1.1 主要试剂及样品

丹参粉(Z20013179)(上海绿谷制药有限公司), 淀粉(GB/T 8885)(华润赛力事玉米有限公司), 甲醇(上海振兴化一工厂), 乳糖(山东丰泰生物科技有限公司), 异丙醇(天津市福晨化学试剂厂), 无水乙醇(上海振兴化工一厂), 正丁醇(上海振兴化工一厂), 醋酸(郑州化学试剂三厂), 氨水(武汉市联碱厂), 已腈(上海振兴化工一厂), 微粉硅胶(湖州展望化学药业有限公司), 微晶纤维素(湖州展望化学药业有限公司), 丹参酮IIA对照品(110766-200619)(中国药品生物制品检定所), 乙酸乙酯(天津市耀华化学试剂厂), 苯(天津市耀华化学试剂厂), 三氯甲烷(天津市耀华化学试剂厂).

1.2 主要仪器

LC-20A高效液相色谱仪(上海伍丰科学仪器有限公司), AG285电子天平(上海精密仪器仪表有限公司), SHZ-95B循环水式多用真空泵(巩义市科瑞仪器有限公司), DHG-9140A型鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂), KQ2200型超声波过滤器(昆山市超声波仪器有限公司), 标准检验筛(上海丰行筛网制造有限公司), 旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司), HH-2型数显恒温水浴锅(江苏荣华仪器制造有限公司), 薄层层析缸(上海信谊), 98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司).

2 实验方法

2.1 颗粒剂制备方法的建立

准确量取适量的丹参粉末，提取2次，每次1 h，将2次提取所得溶液混合，浓缩制成稠浸膏，减压处理使稠浸膏的相对密度为1.10-～1.14(80 ℃热测).加入辅料，混匀，60 ℃干燥处理，继续加入适量辅料，混匀，90%乙醇润湿，制备软材，均匀喷入物料，过16目筛，在50～60 ℃的环境下进行干燥，在相对湿度73%以下的环境中整粒，以5g/袋的标准分装即得.

2.2 测定方法学的建立

2.2.1 丹参颗粒剂的定性分析

本实验采用薄层色谱法对丹参颗粒剂进行定性分析.

1)供试品溶液的制备

①准确量取丹参粉5.00 g置于锥形瓶中，加入一定量的正己烷，超声提取1 h，过滤，回收溶液，得样品溶液A.②准确量取丹参粉5.00 g置于锥形瓶中，加入适量的石油醚，超声提取1 h，过滤，回收溶液，得样品溶液B.③取丹参酮IIA样品溶液，作为样品溶液C.

2)丹参酮IIA对照品溶液的制备

准确称取丹参酮IIA对照品0.500 g，加入甲醇溶液进行超声溶解，将溶液转移至10 mL容量瓶，甲醇定容至刻度，摇匀，得丹参酮IIA对照品溶液.

3)丹参酮IIA的薄层鉴定

取实验中所配置的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液，分别点样于薄层色谱板上，以展开剂苯-氯仿-乙醇(49∶49∶2)展开.

2.2.2 丹参颗粒剂的定量分析

本实验采用高效液相色谱法对丹参颗粒剂进行定量分析.

1)色谱柱的选择

本实验色谱柱为Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，检测波长270 nm，流动相为已腈-0.2%乙酸，实验温度为25 ℃，流速为0.6 mL/min.

2)样品溶液的制备

精准的量取丹参粉末一定量，加入正己烷，在KQ2200型超声波过滤器中进行过滤处理，回收滤液，将所剩残渣按上述步骤重新处理，回收滤液，将俩次所得滤液混合置于容量瓶中，用正己烷定容至刻度线，即得样品溶液.

3)对照品溶液的制备

准确的称取丹参酮IIA对照品一定量置于烧杯中，加入适量的甲醇溶液进行超声溶解，将所得溶液置于容量瓶中，甲醇定容置刻度，摇匀，即得对照品溶液.

4)供试品制备

吸取一定量的样品溶液，蒸干得固体，加入甲醇进行超声溶解，将所得药品置于容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液.

5)样品测定

样品溶液和供试品溶液进样量各5 μL，在色谱柱为Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，已腈-0.2%乙酸为流动相，流动速度大约为0.6 mL/min，检测波长为270 nm的条件下进行测定.

3 实验结果

3.1 丹参酮IIA的薄层鉴定

结果如图1所示.

图1 丹参薄层色谱图

3.2 丹参酮IIA的质量比测定结果

3.2.1 丹参酮IIA质量比的测定

分别精确量取样品溶液和供试品溶液各5μL，按上述色谱条件进行测定，样品色谱峰如图2所示，对照品色谱峰如图3所示.

图2 样品色谱峰I

3.2.2 标准曲线的绘制

分别取对照标准品溶液5、10、15、20、25 μL点在同一薄层板上,以石油醚一乙酸乙酯为展开剂,上行展开,在波长520 nm下扫描,测量峰面积积分值,结果列于表1，以对照标准品的质量浓度为横坐标(X),相应的峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线图，进行线性回归.结果在0.1 ～0.5 mg/mL范围内与峰面积关系良好，回归方程为y=106 599x+31 130，R2=0.999 6.标准曲线如图4所示.

图3 丹参色谱峰及阴性色谱峰

对照标准品体积/μL对照标准品质量浓度/(mg·mL-1)峰面积50.141487100.252489150.363565200.473954250.584054

图4 丹参酮IIA质量浓度测定标准曲线

3.2.3 丹参酮IIA质量比测定结果(n=3)

对不同批次的丹参颗粒剂处理3个样品，进行测定，求平均值，丹参酮IIA质量比如图如表2所示.

表2测定结果

批号丹参酮IIA质量比/(mg·g-1)丹参酮IIA质量比平均值/(mg·g-1)201604208.231201604218.3928.305201604228.293

3.2.4 精密度实验结果

准确量取对照品溶液和供试品溶液，重复进样5次，丹参重现性RSD<2%,见表3.

表3精密度实验结果

药物质量浓度/(mg·mL-1)峰面积RSD/%1.5485578231.5485619450.581.5485619531.5485619181.548561723

试验证明，精密度良好.

3.2.5 稳定性实验结果

取样品供试品溶液，在同一工作日不同时间段进行测量.测得样品峰面积<2%，结果见表4.

表4稳定性实验结果

t/h质量浓度/(mg·mL-1)进样/μL峰面积RSD/%01.5482028753331.5482028547061.5482028817291.548202915100.76121.54820288605

实验证明，稳定性良好.

3.2.6 重现性实验结果

取本品6份放在容量瓶中配成溶液，过滤作为供试品，如表5.

表5重现性实验结果

序号质量浓度/(mg·mL-1)进样/μL峰面积质量比10.51620831165.1621.0322015464110.3231.5482028655315.4842.0642055663220.6452.5802065652225.8063.09620128446530.96

实验结果表明，重复性较好.

3.2.7 回收率测定结果

每组测3次，共测3组，如表6.

表6回收率结果

序号加入量实测量回收率/%平均值/%RSD/%110.3410.34100210.3410.2899.4199.70310.3410.3199.70420.6420.6198.89520.6420.5899.7099.460.665620.6420.6099.80730.9630.97100.03830.9630.8599.6499.85930.9630.9399.90

实验结果表明，回收率良好.

4 结 语

在颗粒剂制备过程中，辅料的选择对制剂成型是否成功至关重要，要按照严格的配比要求来进行配比，如果配比有所偏差，会严重影响颗粒剂的流动，制剂成型率和颗粒剂的效果的考察，同时辅料的选择也非常重要，每种所加的辅料的性质不同所起到的效果也有所差异.相比于干法制粒，湿法制粒是医药工业生产中最为广泛的方法，经过表面润湿后颗粒剂具有外形美观、耐磨性强、压缩成型性好、颗粒质量好等优点，本实验选择高效液相法作为质量比测定方法是因为高效液相法是中药化学最为常用的一种测定中药中有效化学成分的方法，实验中采用高效液相色谱法分析一个样品一般需要20 min左右，相比与其他方法，高效液相色谱法更高效，高效液相色谱法的灵敏度高，在实验室中可测得微升数量级的进样量，此外HPLC的色谱柱可多次使用，不易破坏样品及易回收等优点，此方法为本实验带来了诸多便利，节约了大量时间及成本，实验所测得的主要数据如下：丹参酮IIA在0.1～0.5 mg/mL的范围内呈良好的线性关系，(R=0.999 6)，丹参酮IIA的平均回收率为99.67%，RSD值为0.665%，3个批号的丹参颗粒剂中丹参酮IIA的平均质量比为8.305mg/g，所得结果均在质量标准之内，实验较为成功，颗粒剂具有方便、易于患者携带、口感好、吸收快等特点，深受广大患者的青睐，极具市场潜力，颗粒剂更深层次的研发也将是未来科研工作者的努力方向.

[1] 赵志刚, 郜舒蕊, 侯俊玲, 等. 不同产地加工方法对山东丹参药材质量的影响[J]. 中国中药杂志, 2014(8): 1396-1400.

[2] ZENG Y L, DENG J J, HUO T T,etal. Assessment of genetictoxi city with major inhala blemineral granules in A549cells[J]. Applied Clay Science, 2016, 119: 45-56.

[3] MATTI J, AARETTI K, ANNIKKA K,etal. Compression curve analysis and compressive streng thmea surement of brittle granule bed sinlieu of individual granulem easurements[J] .Particuology, 2015 (1):78-87.

[4] 李蔼文, 谭俊青, 王康椿, 等. 5种中药颗粒剂与水煎剂对5种耐药菌株的体外抑菌作用比较[J]. 检验医学, 2015, (06): 567-570.

[5] CHEN Y, ZHANG N, MA J,etal. APlatelet/CMC coupled with off line UPLC-QTOF-MS/MS for screen inganti platele tactivity components from aqueousextract of Danshen[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 117: 156-173.

[6] 郝文慧, 赵文文, 陈修平. 丹参酮类抗肿瘤作用与机制研究进展[J]. 中国药理学通报, 2014(8): 1041-1044.

[7] XU L H, SHEN P Q, BI Y L,etal. Danshen injection ameliorates STZ-induced diabeticne phropathy inas sociation with suppression of oxidativestress, pro-inflammatory factors and fibrosis[J]. International Immunopharm acology, 2016 (3): 34-65.

[8] 袁 媛, 吴 芹, 石京山, 等. 丹参及其主要成分保肝作用的研究进展[J]. 中国中药杂志, 2015 (4): 588-593.

[9] ZHI H L, LI J H. Granuled escription based on formal concept analysis[J]. Knowledge-Based Systems, 2016(18): 59-87.

[10] OSCAR D B, ANDREA I C, MATILDEDE P,etal. Rab3A, apossible marker of corticalgranules, participate sincortical granule exocytosisin mouseeggs[J]. Experimental Cell Research, 2016, (87):597-613.

[11] 李胜坤. 乌锦颗粒剂的制备与药效毒理学研究[D]. 北京:中国农业科学院, 2015.

[12] KAI J Y,YANG C,HUANG J H,etal. Qualitative and quantitative analyses of Compound Danshen extract based on 1HNMR method and its application for quality control[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016(9) :36-47.

[13] 段佳丽, 薛泉宏, 舒志明, 等. 放线菌Act12与腐植酸钾配施对丹参生长及其根域微生态的影响[J]. 生态学报, 2015(6): 1807-1819.

[14] TAKUMI A, MITSUAKI K, YASUSHI O,etal. Anin novative method for thepre paration of high API-loaded hollows pherical granules forusein controlled-release formulation[J]. International Journal of Pharmaceutics, 2017, 523(1): 76-98.

[15] ZHOU H J, CHU Y, WANG X Y,etal. Simulta neousd etermination and pharmaco kinetics of danshensu, protocate chuical dehyde, 4-hydroxy-3-methyloxyphenyl lacticacid and protocate chuicacid in human plasmaby LC-MS/MS after oralad ministration of Compound Danshen Dripping Pills[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2017 (7): 43-65.

[16] 罗 超, 罗 越, 陈麒同, 等. 颗粒剂制备方法的研究进展[J]. 甘肃科技, 2014(21): 140-141.