猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测方法比较试验

2018-01-16唐义红陈嘉敏深圳市坪山区动物卫生监督所

食品安全导刊 2018年15期

□ 唐义红陈嘉敏深圳市坪山区动物卫生监督所

人类在食用含“瘦肉精”的猪肉后，因其具有残留性和稳定性，会致使人们动物性食物中毒，本次测试，是为寻求一种能准确且快速检测盐酸克伦特罗的方法。检测过程中使用盐酸克伦特罗快速检测试纸条法和ELISA-竞争酶标免疫法分别对73份生猪尿样本进行对比检验。再利用固相萃取-气相色谱-质谱分析方法（GC-MS）对以上2种检测方案结果实施确证。现把测试的过程和实验结果阐述如下。

1 材料准备

①实验样本及来源：生猪尿液；养猪场、屠宰场。②样本数：73份。③样本保存：零下20 ℃冰箱储藏备用。④试剂准备：竞争酶标免疫试剂盒(包含试剂与标准品），于北京望尔生物技术有限公司购买。盐酸克伦特罗快速监测试纸条（包含试纸条与滴管），于广东省广东省农业科学院技术研究处购买。

2 试验方法

2.1 ELISA-竞争酶标免疫法

2.1.1 测试材料与设备

ELISA试剂盒：测试肌肉、肝脏、尿液中的含量，其包含了所有测试用的试剂。需用微孔板酶标仪（450nm）用于定量分析[1]。

2.1.2 测试过程

把待检尿液2 000 g离心10 min后留用上层清液。测前把所有试剂与测试尿液放置室温19～25 ℃；把足量标准品/样本20μL导入微孔中，再加入酶标二抗50μL/孔。标准品与样本进行2个平行实验。记录各自位置；将抗体工作液80μL/孔利用稀释剂进行稀释后，再导入微孔中，然后将微孔口密封，室温放置15 min；将微孔内液体倒出后，把微孔架具倒立在吸水纸上，通过拍打和擦拭除尽孔中液体，然后将250μL试剂盒提供的洗涤工作液导入微孔中，再将微孔液体倒掉，重复2遍以上操作；仔细摄取20 μL标准液和经过处理的样品溶剂导入微孔，同样利用准确溶液和样品溶液进行2个平行测试；导入酶标二抗50 μL物至微孔底面，将其均匀混合密封，室温孵育30 min后倒出液体。再次消释微孔中的液体，将250μL工作洗涤液导入微孔后，与上述步骤一样，倒掉微孔中的液体，重复进行两次操作；将发色剂和基质各100 μL导入微孔，继续利用振荡仪器进行振荡均匀，然后通过室温遮光孵育15 min；将终止液50 μL/孔终止液导入微孔，振荡均匀。在微孔的450nm刻度处，借助空气让空白测试吸光度值。

2.1.3 鉴定测试结果

检测结果≥5μg/L，判定为阳性＜5 μg/L，检测结果，判定为阴性，盐酸克伦特罗的检出限为0.5 μg/L。尿液稀释系数为1。

2.2 盐酸克伦特罗快速检测试纸条法

2.2.1 样品准备

尿液放置室温20～24 ℃。同样2 000 g离心10 min。留用上层清液进行测试。

2.2.2 测试过程

分别向检测板孔中倒入标准品1、标准品2与80 μg待检尿液；把此检测孔板条平衡固定于检测板，并与试纸共同置于25 ℃的冰箱中，注意不要将试纸条插入样品；15～20 min，将试纸条一起置于检测板孔中；同样，此时再次把检测固定板和试纸一起平衡放入4℃的冰箱之中。切勿将试纸取出检测孔，还要保证试纸是平放在检测孔底面的；放置8～10min后开始判定结果。

2.2.3 检测结果判定过程及记录

将试纸和测试固定板共同置于4℃的冰箱之后进行计时，在8 min后观察发现标准品1的反应线条明显显现出棕红色，而相对于标准品1的反应线颜色标准品2要淡很多；10 min左右把待检测的样本反应线与标准品1、2颜色进行对比然后进行结果判定，若颜色浅，则盐酸克伦特罗的含量越多，颜色也深，则含量越少；若待检样本颜色与1的反应线颜色相比并不觉浅，则鉴定为未检出；若待检测样本颜色深度呈现在两者之间时，那么盐酸克伦特罗的含量的含量也同样介于标准品1与2之间，即0～5ng/mL；若待检样本其颜色深度明显浅于标准品2，那么它的含量则高于标准品2的含量，即＞5ng/mL。

2.3 固相萃取-气相色谱-质谱分析法

GC-MS分析方法是全球统公认的检测克伦特罗残留的证实方法，这种方式是通过将盐酸克伦特罗在离子与C18固相萃取柱上萃取。不同度数的克伦特罗萃取回收率为75%～95%，最低检测度数为0.5ng/mL，而它的硅烷化产物，利用选取离子的形式进行检验（86、243、262、277）。

3 结果

经过对73份样本猪尿液中盐酸克伦特罗检测获悉：其中有1份的生猪尿液通过快速检测试纸条法检测后显示克伦特罗含量＞5ng/mL，呈阳性。而利用ELISA方法对73个猪尿样本进行测试时，没有发现阳性样品，即是表明盐酸克伦特罗含量5ng/L。最后利用GC-MS分析法对73份样本进行确证，样本中其含量都未达到5ng/L，即GC-MS分析方法测试为阴性。