高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂

2018-01-16罗长琴重庆市万州食品药品检验所

食品安全导刊 2018年15期

□ 罗长琴重庆市万州食品药品检验所

1 材料选择与方法

1.1 仪器选择与试剂

本次实验中选择的仪器是高效谱相色谱仪。合成着色剂的标液为日落黄、亮蓝、柠檬黄、苋菜红以及胭脂红，为0.5 mg/mL。80%的诱惑红为SIGMA-ALDRICH。甲醛是液相色谱淋洗液，60 mL的甲醛与40 mL的甲酸进行混合，蒸馏水与20%的柠檬溶液进行调节，将pH值调为6。其他选择的试剂是分析纯。

1.2 溶液配制方法

进行不同浓度的标准物质储备液的配制工作，喹啉黄为0.97 mg/mL，亮蓝为0.25 mg/mL，日落黄、柠檬黄、靛蓝、胭脂红、胭脂红与苋菜红为0.5 mL，新红为0.75 mg/mL，诱惑红为0.8 mg/mL，选取2 mL的储备液放置到50 mL的量瓶之中，加水混合均匀以后将其配制成标准溶液。基于此绘制相应的峰面积与标准曲线。

1.3 样品处理方法

在样品处理方法上，首先配制样品的溶液，根据聚酰胺吸附法进行色素的提取工作，样品浓缩之后加水进行溶解定容，在包括赤藓红的样品中运用50%的甲醇进行溶解定容，之后进行HPLC分析。

1.4 液相色谱分析条件

本次实验中的色谱柱为Agilent-ZORBAXSB-C 5μm，4.6 mm×250 mm，有机相为甲醇：乙腈（3∶1），进行梯度洗脱工作，通过多通道检测，最终达到的波长：亮蓝为625 nm，靛蓝为290 nm，新红、赤藓红与苋菜红为529 nm，柠檬黄与喹啉黄为428 nm，胭脂红与诱惑红为507 nm，日落黄为483 nm。

2 结果

2.1 最低检测限

选取5 g的空白样品加上标准溶液，加水之后定容到25 mL，之后进行色素的提取，运用HPLC法进行测定，最终的最低检出限分别为喹啉黄是0.1 mg/kg，亮蓝是0.03 mg/kg，新红是0.9 mg/kg，日落黄、柠檬黄、胭脂红、靛蓝与苋菜红是0.06 mg/kg，赤藓红是0.08 mg/kg，诱惑红是0.10 mg/kg。

2.2 精密度实验

选取碳酸饮料样品加上一定量的混合标准溶液将其制成模拟样品，通过8次测定，得出相应的标准偏差，可以得到赤藓红的标准偏差为5.7%，柠檬黄为2.2%，喹啉黄为3.5%，新红为2.2%，亮蓝为1.8%，靛蓝为3.9%，诱惑红为1.9%，日落黄为1.3%，苋菜红为1.6%，胭脂红为1.4%。

3 讨论

3.1 流动相

本次实验中采用了梯度洗脱的方式分离十种合成着色剂，流动相的选择中使用甲醛+0.02 mol/L乙酸铵的情况下，能够很好地分离前七种着色剂，但是在后三种着色剂中难以实现有效地分离。如果将流动相设置为甲醛：乙晴（3∶1）为+0.02 mol/L乙酸铵的情况下能够充分地分离全部的10种着色剂[1]。

3.2 波长的测定

如果运用254 nm方法测定不同种类的着色剂，难以达到比较高的灵敏性与特异性，同时食品中具有的杂质成分也影响了着色剂的测定。为此可以首先测定最佳梯度，有效优化波长情况。在不同染色剂的波长中可以运用二级管阵列检测器多通道进行有效检测，这能够提升亮蓝等各种着色剂的特异性与灵敏性，并且减少梯度洗脱过程中基线漂移现象的发生。

3.3 测定喹啉黄

喹啉黄一般是在配制酒中进行使用，最多使用量应当控制在0.1 g/L，在巧克力等食品中禁止使用。目前，在对其的检测中没有固定的方法，因此应当加强对喹啉黄检测的研究。喹啉黄分子比较难以溶于水，在食品添加剂中使用的是喹啉黄磺酸钠盐，能够实现不同磺酸盐的有效混合。在本色谱条件下具有两个色谱峰，根据HPLC-MS，具有2个色谱峰与质谱图比较相似，在352 m/z条件下能够达到最高的离子流量强。在定量指标中可以设置为2个峰的面积，同样能够展现比较良好的线性关系[2]。

3.4 测定赤藓红

在色素洗脱完成之后进行浓缩与水定容，运用0.45 μm滤膜进行过滤，运用HPLC进行测定。在进行精密度与回收率实验过程中，在水定容之后的样品溶液中存在红色沉淀现象。通过分离沉淀步骤，能够使用甲醛进行溶解，最终检测出赤藓红，它是一种四碘荧光素钠盐，比较容易溶于水，溶解性比较容易受到溶液pH值的影响。在样品中放入一定量的赤藓红，可以使用50%的甲醛进行定容。在滤膜过滤过程中能够吸附色素，在过滤过程中色素容易发生改变，因此应当选择吸附作用比较小的滤膜。