刘 艳，金 鹏，王惠民

（淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300）

普鲁卡因庆大霉素口服溶液为复方制剂，其组分为每200 mL含硫酸庆大霉素160万单位（按庆大霉素计）与盐酸普鲁卡因2 g。生产企业原标准中无主药成分的含量测定，为建立较为完整的质量标准，达到有效控制产品质量的目的，我们增加了硫酸庆大霉素的含量测定方法。本法参考相关书籍文献建立了抗生素微生物检定法测定硫酸庆大霉素含量，用于多批样品的测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

ZY-300IV多功能微生物自动测量分析仪（北京先驱威锋技术开发公司）；PYZ-DHS型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械有限公司）；XS205电子天平（Mettler公司）；高压蒸汽灭菌锅（Panasonic公司）。

1.2 试药

短小芽孢杆菌[CMCC（B）63 202]；庆大霉素标准品（每毫克相当于630单位，批号为130326-201015，中国食品药品检定研究院）；3批普鲁卡因庆大霉素口服溶液（200 mL：硫酸庆大霉素16万单位（按庆大霉素计）与盐酸普鲁卡因2 g，批号分别为160831、160901、160902，由生产厂家提供）；阴性样品（由生产厂家提供）；抗生素检定I号培养基（高pH），批号为3105457，广东环凯微生物科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 试验条件

2.1.1 菌悬液的制备

取经过预试验的试验菌液适量加至培养基中，摇匀，备用。

2.1.2 标准品溶液的制备

精密称取庆大霉素标准品适量，加灭菌水溶解并制成约1000单位/mL的溶液，精密量取适量，用灭菌磷酸盐缓冲溶液（pH7.8）稀释成约12单位/mL（S2）和3单位/mL（S1）的溶液。

2.1.3 样品溶液的制备

精密量取样品5 mL，置40 mL量瓶中，用灭菌水稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用灭菌磷酸盐缓冲溶液（pH7.8）稀释成约12单位/mL（T2）和3单位/mL（T1）的溶液。

2.1.4 阴性样品溶液的制备

精密量取不含硫酸庆大霉素的阴性样品，同“样品溶液的制备”方法配制。

2.1.5 培养与测试

照抗生素微生物检定法（《中国药典》2015年版四部通则1201[1]）测定。方法中高、低剂量为1:4，培养温度35～37℃，培养时间14～16小时；

2.2 对新方法的验证

按《中国药典》2015年版四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则[2]、《中国药典分析检测技术指南》抗生素微生物检定法[3]与《药品微生物学检验技术》抗生素微生物鉴定法[4]对新建方法进行验证。

2.2.1 专属性

取阴性样品溶液，按上述培养方法进行测定，未产生抑菌圈，对结果无干扰，表明该方法专属性良好。

2.2.2 线性与范围

根据硫酸庆大霉素的对数浓度（剂量）与抑菌圈（反应）关系的直线范围内，选择一个中心浓度C0为5单位/mL；按剂距为1:0.8，各剂量按等比级数稀释成系列浓度，每个浓度为一组，设10组，每组5个碟子；在各双碟菌层培养基表面，按等角距位置安置4枚钢管；在各组每个双碟钢管相隔的钢管内，均滴加中心浓度溶液，其余两个钢管内滴加C1、C2、…Cn各浓度组溶液；滴加完毕后，将双碟在规定温度下培养14～16小时后，测定各抑菌圈直径，计算。得出线性回归方程y=0.6968+0.2192（X-17.7440）（r=0.9984），硫酸庆大霉素在浓度1.8225单位/mL～13.5790单位/mL范围内与抑菌圈成线性关系，平均可信限率为6.7。

2.2.3 准确度

向不含硫酸庆大霉素的阴性样品中加入已知量的硫酸庆大霉素对照品进行测定。精密称取硫酸庆大霉素对照品制成每1 mL中分别约含80单位、100单位、120单位的溶液，分别用pH7.8的磷酸盐缓冲液按1:4的比例稀释成高低浓度溶液，作为对照品溶液。精密称取硫酸庆大霉素对照品，分别加阴性样品，用pH7.8的磷酸盐缓冲液按1:4的比例稀释成高低浓度溶液，为回收测试样品溶液。普鲁卡因庆大霉素口服溶液中硫酸庆大霉素含量约为1%，根据指导原则，回收率限度应为92～105%。取上述各溶液，按上述效价方法测定，结果为97～104%，在规定范围内。

2.2.4 精密度

根据指导原则，精密度RSD应≤2%。取同一批号6份样品，制备样品溶液，按上述方法测定，计算结果分别为100.0%，100.8%，100.2%，100.3%，100.3%，100.5%，可信限率均不大于7%，平均值为100.4%，RSD为0.3%，在规定范围之内。

2.2.5 稳定性

分别在0 h、24 h和48 h测定对照品溶液和样品溶液抑菌圈，计算结果，含量分别为100.4%、100.4%、100.0%，RSD为0.3%，表明样品在48h内稳定性良好。

2.3 样品测定

取不同批号三批样品，按以上拟定的含量测定方法检验，计算硫酸庆大霉素含量，测定结果为100.0%，101.3%，100.7%，可信限率均不大于7%。

3 讨 论

本研究根据硫酸庆大霉素特点，并结合短小芽孢杆菌生长特性，建立了抗生物微生物二剂量法测定硫酸庆大霉素含量，该方法中形成的抑菌圈边缘清晰大小符合规定，可以使用抑菌圈测量仪进行测量，可以大大提高测定结果的准确性。通过系统的方法学验证，证明了新方法的可靠性，该方法可以作为普鲁卡因庆大霉素口服溶液中硫酸庆大霉素含量的常规质量控制方法。