cAMP 反应元件结合蛋白( cAMP response element binding protein， CREB)是一种存在于真核生物细胞核内蛋白， CREB 与真核生物 cAMP 反应元件结合，启动基因转录，又称之为转录增强因子。 CREB 功能表现在生命活动的各个方面，如调节细胞周期， 影响胎儿 T 细胞的发育，影响肝脏代谢、影响神经元细胞的存活和再生等。在培养的皮层神经元中，利用 siRNA 及基因敲除等技术证明，神经营养因子通过 MSK-1 激活 CREB 促进神经元的存活。研究表明 CREB 对心脑缺血再灌注损伤具有保护作用[1]。视网膜缺血再灌注损伤的小鼠视网膜中神经元的丢失主要集中在视网膜神经节细胞层(retinal ganglion cells,RGC)。我们观察了视网膜缺血1 h再灌注后，中长期( 7、 14、21 d)神经元细胞凋亡情况。 CREB 在脑组织缺血再灌注的研究结果显示对神经元具有保护作用，因此，我们检测了 CREB 在该模型中的表达改变，研究其与视网膜神经节细胞之间的关系。

资料与方法

一、材料

实验动物：取健康清洁的 8 周龄 C57/BL6J 小鼠 90 只，雌雄兼有(我院动物实验中心提供)。所有动物均在我院动物实验中心的 SPF 环境下饲养。所有动物的饲养与处死均按照美国国立卫生研究院( National Institutes of Health， NIH )的《实验动物管理及使用指南》进行。

主要试剂与抗体：Trizol Invitrogen， 15596-018)；显影定影试剂 谷歌生物；Actin santa cruz；BCA 蛋白定量检测试剂盒 Bio-rad；cDNA 第一链合成试剂盒， Fermentas #K1622；SYBR Green/Flourescein qPCR Master Mix(2X)： Fermentas ， #K0242；Ex TaqTM TAKARA， DRR100A；DL2000 DNA Marker TAKARA， D502A；引物合成 金斯瑞；CREB CST， #9197。

二、方法

1.视网膜缺血再灌注模型的建立用前房加压灌注方法，将 200 ml 生理盐水输液袋悬于距大鼠眼球 1.36 m 高处。麻醉后，在显微镜下用 32G×6 mm 胰岛素针头穿刺入前房，此时眼压 相当于 100 mmHg(136 cm H20=100 mmHg， 1 kPa=7.5 mmHg ， 100 mmHg=13.3 kPa)，观察若出现瞳孔逐渐散大，虹膜、视网膜缺血，角膜逐渐水肿呈雾状，则视网膜缺血再灌注模型构建成功。……