徐亚维+李福新+薛建+王霞

摘要： 利用冷休克表达载体构建含有人胸腺肽α原（proTα）编码基因的质粒并在大肠杆菌单一蛋白生产（SPP）系统中表达单一的可溶性蛋白。以proTα mRNA基因序列为模板敲出ACA序列，设计并合成proTα-lessACA目的基因片段后，直接克隆到原核冷休克表达载体pColdⅡ（sp-4）上，将pColdⅡ（sp-4）-proTα-lessACA质粒转化到Escherichia coli BL21感受态细胞中，筛选阳性克隆后采用Nde Ⅰ和Hind Ⅲ限制性内切酶双酶切鉴定。共转pMazF质粒后，采用冷休克方法表达proTα并采用SDS-PAGE检测鉴定。结果成功构建重组表达质粒pCold Ⅱ（sp-4）- proTα-lessACA，经冷休克表达后在E. coli BL21（DE3）菌中获得大量单一的proTα。原核表达质粒pCold Ⅱ（sp-4）- proTα-lessACA构建和单一proTα在SPP系统中表达的成功，为进一步研究proTα结构和生理功能提供帮助。

关键词： 人胸腺肽α原；单一蛋白生产系统；冷休克表达

中图分类号： Q786 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2017）22-0038-02

胸腺肽（thymosin）是一组由胸腺组织分泌的具有调节和增强人体细胞免疫功能的生物活性肽，能促使有丝分裂原激活后的外周血中的T淋巴细胞成熟，主要包括胸腺五肽、胸腺肽α和胸腺肽β等[1]。其中由Goldstein等在1977年首次分离获得具有28个氨基酸组成的胸腺肽α1（thymosin alpha 1，Tα1），效果尤为显著[2]，主要分布于胸腺上皮细胞，也存在于淋巴、脑、脾、肺、肾等组织细胞中[3]。Tα1在机体免疫应答中发挥重要作用，可以促进干扰素及各种淋巴介素的分泌，增强自然杀伤细胞介导的细胞毒性，是一种强效的细胞免疫增强剂[4]，广泛应用于治疗抗生素不能有效控制的严重感染，恶性肿瘤所致的免疫功能低下，乙型肝炎、丙型肝炎及其并发症等[5]。Tα1最初从动物胸腺中提取，这种制备方法由于原料来源有限、含量极低、纯化工艺复杂等原因逐渐被淘汰。……