丁兆猛 栾 雨

高效液相色谱法同时测定加替沙星滴眼液中加替沙星和羟苯乙酯的含量

丁兆猛1栾 雨2

目的建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定加替沙星滴眼液中加替沙星和羟苯乙酯的含量。方法采用Zorbax XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长256 nm，柱温：35 ℃。结果加替沙星浓度在2.98～29.8 μg/ml范围内与线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为99.03%，相对标准偏差（RSD）为0.86%（n=6）；羟苯乙酯浓度在3.26～32.6 μg/L范围内线性关系良好（r=0.9999），平均加样回收率为99.44%，RSD为1.02%（n=6）。结论HPLC操作简便快捷，结果准确，重现性好，可同时测定加替沙星和羟苯乙酯的含量，为该制剂的质量控制提供参考。

加替沙星滴眼液；羟苯乙酯；高效液相色谱法

加替沙星是第四代氟喹诺酮类抗菌药物，主要通过抑制细菌DNA旋转酶和拓扑异构酶IV发挥抑菌作用，其眼用制剂已广泛应用于敏感菌所致的急性细菌性结膜炎、角膜炎等治疗中，临床疗效确切[1]。羟苯乙酯是一种常用的眼用制剂防腐剂，接触眼睛可引起疼痛、刺激等不适反应，美国食品药品监督管理局（FDA）规定羟苯乙酯的最大用量为0.05%[2]。因此，测定滴眼液中羟苯乙酯的含量应作为其质量控制指标之一。本研究利用高效液相色谱法（HPLC）同时测定加替沙星滴眼液中加替沙星和羟苯乙酯的含量，具有操作简便快捷、结果准确、重现性好等特点，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器美国Waters2695高效液相色谱仪；Waters2487紫外检测器；WatersM32色谱工作站；瑞士METTLER AE-240型电子天平；JPCQ1028全数字超声发生器（武汉嘉鹏电子有限公司）。

1.2 药品与试剂加替沙星对照品，中国食品药品检定研究所提供，批号：130518；羟苯乙酯对照品，中国食品药品检定研究所提供，批号：100847；加替沙星滴眼液，镇江威特药业有限责任公司提供，批号：150409、150820、151013，规格：0.30%:8 ml；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液取适量加替沙星对照品，精密称定，置于100 ml量瓶中，加流动相震荡至溶解，再稀释并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液2 ml，置于100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含100 μg加替沙星的对照品溶液。另取羟苯乙酯对照品适量，精密称定，置于100 ml量瓶中，加水适量，在水浴中加热至溶解，冷却后加水稀释并定容至刻度，摇匀，制成每毫升含1 mg羟苯乙酯的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液精密量取加替沙星滴眼液2 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀即得。

2.2 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）；流速：1.0 ml/min；柱温：35℃；进样量：20 μl。上述色谱条件下，加替沙星滴眼液样品中其他成分对加替沙星和羟苯乙酯的测定无明显干扰，色谱图见图1。

图1 混合对照品溶液HPLC图谱（1为加替沙星；2为羟苯乙酯）

2.3 线性条件及范围分别精密量取加替沙星和羟苯乙酯对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml置于100 ml量瓶中，加替沙星对照品溶液加流动相稀释至刻度，羟苯乙酯对照品溶液加水稀释至刻度，制备成加替沙星浓度分别为2.98、5.96、8.94、11.92、17.88、23.84、29.8 μg/ml和羟苯乙酯浓度分别为3.26、6.52、9.78、13.04、19.56、26.08、32.6 μg/L的系列对照品溶液，精密吸取上述溶液20 μl，分别进样测定，记录峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积Y为纵坐标，分别绘制标准曲线，求得加替沙星的标准曲线方程为Y=26 091C+35，r=0.9998；羟苯乙酯的标准曲线方程为Y=10 052C+201，r=0.9999。结果表明，加替沙星和羟苯乙酯分别在2.98～29.8 μg/ml和3.26～32.6 μg/L浓度范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验分别取2.1.1项下加替沙星和羟苯乙酯对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果显示加替沙星和羟苯乙酯峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.07%和0.04%，表明选定色谱条件的精密度较好。

2.5 稳定性试验分别取制备好的同一加替沙星和羟苯乙酯样品溶液，室温放置，于0、2、4、6、12、18、24 h分别进样测定，记录峰面积，结果显示加替沙星和羟苯乙酯峰面积的RSD分别为0.13%和0.08%，表明加替沙星和羟苯乙酯溶液室温放置24 h内稳定。

2.6 加样回收率试验取已知含量的加替沙星和羟苯乙酯样品溶液各6份，分别加入一定数量的对照品，按照选定色谱条件，进样测定，记录峰面积，根据各自的线性方程计算相应回收率，结果见表1-2。

表1 加替沙星加样回收率试验结果

表2 羟苯乙酯加样回收率试验结果

2.7 样品测定精密量取不同批号的加替沙星滴眼液各3份，依法制备供试品溶液，按选定色谱条件，进样测定，记录峰面积，按照内标法分别计算样品中加替沙星的百分标示量和羟苯乙酯含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

本研究采用HPLC同时测定加替沙星滴眼液中加替沙星和羟苯乙酯的含量，参照有关文献[3-5]，本试验曾比较过甲醇-0.008 mol/L磷酸盐缓冲液-0.5 mol/L四丁基溴化铵溶液（45:55:0.6）、甲醇-乙腈-甲酸（15:15:70）以及乙腈-0.1%磷酸溶液（60:40）3种流动相，3种流动相中加替沙星与羟苯乙酯分离度均能达到要求，但前两种流动相中加替沙星有拖尾现象，第3种分离度更好，且保留时间比较适宜，故选择第3种为流动相。

样品测定结果表明，镇江威特药业有限责任公司生产的加替沙星滴眼液中羟苯乙酯的含量并未超出美国FDA规定的限量要求。该方法操作简便快捷，结果准确，重现性好，可为该制剂的质量控制提供参考。

[1]付晶晶.加替沙星的临床应用[J].中国现代药物应用,2010,4(5):136-137.

[2]FDA.Inactive Ingredient Search for Approved Drug Products[EB/OL].[2013-08-13].http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/iig/index.cfm.

[3]陈一凡,赵谢她.高效液相色谱法测定加替沙星分散片中加替沙星的含量[J].广州化工,2013,41(22):116-117.

[4]缪玉山,倪冲,倪桃,等.反相高效液相色谱法测定加替沙星胶囊中加替沙星及有关物质的含量[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(6):503-505.

[5]陈晓红,李小平,姚浔平.高效液相色谱法测定全血中加替沙星[J].理化检验(化学分册),2009,45(1):4-6,10.

Simultaneous determination of gatifloxacin and ethylparaben in gatifloxacin eye drops by HPLC

Ding Zhaomeng Luan Yu

ObjectiveTo develop a HPLC method for the simultaneous determination of gatifloxacin and ethylparaben in gatifloxacin eye drops.MethodsThe PHLC was performed on Zorbax XDB-C18column(4.6 mm×150 mm,5μm).The mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid(60:40).The flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was 256 nm.ResultsThe linear range of gatifloxacin was 2.98～29.8 μg/ml(r=0.9998),the average recovery was 99.03%(n=6);The linear range of ethylparaben was 3.26～32.6 μg/L(r=0.9999),the average recovery was 99.44%(n=6).ConclusionHPLC is simple,accurate and repeatable.It can be applied to controlling the quality of gatifloxacin eye drops.

Gatifloxacin eye drops;Ethylparaben;HPLC

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.12.007

1江苏省泰州市第四人民医院，江苏泰州 225300

2江苏省镇江市药品检验所，江苏镇江 212000