徐杰，刘德山

（1. 山东大学，山东 济南 250013；2. 山东省济南市第五人民医院，山东 济南 250022）

丹参川芎嗪注射液对急性心肌梗死模型大鼠抗氧化应激实验研究

徐杰1,2，刘德山1*

（1. 山东大学，山东 济南 250013；2. 山东省济南市第五人民医院，山东 济南 250022）

目的探讨丹参川芎嗪注射液对急性心肌梗死模型大鼠抗氧化的相关机制。方法观察三组大鼠心脏的变化，超声心动图测算LVEF和FS的数值，ELISA检测三组大鼠的cTnI、MDA、SOD。结果实验组大鼠心脏状态明显优于对照组，实验组的EF及FS明显高于对照组（P＜0.05），三组比较，假手术组EF及FS最高。治疗后，实验组cTnI、MDA的表达明显低于对照组（P＜0.05），SOD的表达明显高于对照组（P＜0.05）。结论丹参川芎嗪通过抗氧化应激的作用达到保护心肌细胞，改善心肌缺血程度，降低心肌梗死对心脏功能的损伤。

丹参川芎嗪注射液；心肌梗死；抗氧化；实验研究

急性心肌梗死时由于心外膜下冠状动脉突然闭塞所引起的缺血性心肌坏死，是导致冠心病死亡的主要原因。在梗死的过程中，由于缺血所引起的线粒体呼吸链过度的产生自由基，主要包括活氧自由基及反应性氮自由基，当机体自由基产生过多后，则会引起氧化应激反应，致使出现氧化损伤，心肌细胞的死亡[1]。因此近年来关于心肌梗死的研究重点开始侧重于如何通过抗氧化应激达到保护心肌梗死后心肌细胞的目的。近年来研究发现丹参川芎嗪注射液具有促进心脏功能恢复，减少梗死面积，降低心肌兴奋性和导电性等作用。在我们的研究中，通过对大鼠心肌梗死模型给予丹参川芎嗪干预，进一步探讨丹参川芎嗪保护心肌，降低心肌梗死损害的相关机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 动物 购自北京维通利华，SD大鼠，体重200 g-220 g，动物许可证号SCXK（京）2011-0011。

1.1.2 药物与试剂 丹参川芎嗪注射液购自贵州拜特制药有限公司（国药准字H52020959）。cTnI ELISA Kit试剂盒购自Life Diagnostics，MDA及SOD ELISA Kit试剂盒购自南京建成。

1.2 方法

1.2.1 心肌梗死模型的建立 通过冠状动脉结扎制备大鼠心肌梗死模型。建模后心电图检测ST段抬高，心肌紫绀，松扎后ST段下降1/3以上，心外膜充血为造模成功[2]。

1.2.2 分组 心肌梗死大鼠模型建立后，大鼠分为模型组及假手术组，模型组按照数字编码的方式随机分为实验组和对照组，每组10只。

1.2.3 给药 实验组通过腹腔注射给予丹参川芎嗪10 mL/kg（丹参川芎嗪：0.9%的氯化钠=2:1），对照组及假手术组给予腹腔注射0.9%的氯化钠注射液10 mL/kg，三组连续腹腔注射14 d，每天1次。

1.3 检测指标

1.3.1 左心室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（FS） 通过脉冲多普勒检测心功能，连续检测3次，取平均值。

1.3.2 ELISA检测三组大鼠的cTnI、MDA、SOD 抗原稀释后于湿盒静置，弃液体后封闭液封闭。加入样品稀释液，清洗后加入底物液，避光之后加入终止液终止反应，上机检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件分析数据，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠心脏取材结果 通过对大鼠心脏取材后发现，对照组大鼠心肌梗死部位心前壁变薄，塌陷；假手术组颜色呈红色，心脏饱满。而实验组较对照组比较，实验组心脏更为饱满，颜色更加红润，但与假手术组比较，颜色较假手术组浅，心室前壁明显变薄。

2.2 超声心动图检测三组EF、FS的改变 通过超声心电图检测三组大鼠治疗后左心室各节段容积-时间曲线可以发现，假手术组的大鼠左心室阶段容积-时间曲线整齐有序，波峰明显，峰值一致；对照组各阶段容积-时间曲线平直，起伏不一致，峰值不明显；而实验组经过丹参川芎嗪的治疗后，其波峰波谷较实验组明显，且波峰整齐高度相对一致。通过对三组大鼠的LVEF及FS比较发现，在治疗后，实验组的EF及FS明显高于对照组（P＜0.05），同时对照组的LVEF及FS明显低于假手术组。三组比较，假手术组EF及FS最高，见表1。

2.3 ELISA检测三组大鼠血清cTnI、MDA、SOD的表达在治疗后，实验组cTnI、MDA的表达明显低于对照组（P＜0.05），SOD的表达明显高于对照组。而假手术组不管治疗前或治疗后，其cTnl、MDA、SOD的表达明显优于对照组及实验组，见表2。

3 讨论

丹参川芎嗪提取于丹参和川芎之中，丹参具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦之效，在临床上主要用于治疗心血管疾病，包括心绞痛、心肌梗死和中风等。现代研究证明，丹参具有多种药理作用，包括松弛冠状动脉、抗凝、减轻I/R损伤和抗心律失常的作用[3]。川芎具有活血行气，祛风止痛之效，既能行散，上行达颠顶，又入血分，下行达血海。川芎被研究证明具有保护线粒体和改善能量代谢来增加冠状动脉血流量和全身循环，清除氧自由基，保护心肌细胞的作用[4,5]。因此在我们的实验中，选取了丹参和川芎的提取物丹参川芎嗪作用于心肌梗死的大鼠模型，为进一步探讨丹参川芎嗪减少心肌梗死损伤，保护心功能的相关机制研究。

表1 三组治疗后LVEF、FS的改变（Mean±SD）

随着对心肌梗死研究的深入，国内外的学者发现梗死的心肌处于氧化应激（oxidative stress, OS）的状态[6]。越来越多的研究证明，氧化应激与心肌梗死的发生及发展转归密切相关。氧化应激是指机体收到有害刺激时，体内所产生的活性氧自由基化（reactive oxygen species,ROS）及活性氮自由基（reactive ntrogen species,RNS）所引起的细胞和组织的病理反应。过量的ROS可能会破坏细胞结构，诱导凋亡甚至坏死。MDA是脂质过氧化物的最终产物，能反映氧自由基的产生，其含量不仅能反映体内氧自由基的形成，而且能够反映氧自由基引起的组织损伤的严重程度[7]。SOD是一种特殊的清除剂，能减少自由基对心肌细胞的损伤。Eskandari等[8]通过对200例患有心血管疾病的患者及200名正常对照组的患者筛选所有受试者的基因组DNA，发现其中SOD1基因启动子缺失的受试者，其患有心血管疾病的风险明显升高。在我们的研究中发现，当出现心肌梗死时，大鼠血清中MDA出现了明显的升高，氧化应激加重而SOD出现了降低，说明心肌细胞受到了损害。但当给予丹参川芎嗪干预后，降低了MDA的水平，同时SOD的水平得到提高，说明心肌的损伤减少，SOD对于自由基的清除能力增强，对心肌细胞起到了保护作用。

通过我们对心肌梗死模型大鼠研究发现，当给予大鼠丹参川芎嗪干预后，大鼠的心脏形态、色泽均明显优于对照组，说明丹参川芎嗪可以明显的改善心肌梗死后对心脏所带来的伤害。并且进一步对大鼠行动态心动图发现，对照组的大鼠各阶段容积-时间曲线平直，起伏不一致，峰值不明显；而实验组经过丹参川芎嗪的治疗后，其波峰波谷较实验组明显，且波峰整齐高度相对一致，说明实验组其心肌缺血的程度得到了明显的改善，同时可以调节心肌供血。EF为射血分数，用于判定心脏功能，而LVEF为左心室射血分数，当LVEF＜50%时，成为心功能不全，当LVEF＜40%时，可判定为收缩期心力衰竭。在我们的研究中通过检测左心室射血分数发现，当给予心梗大鼠模型丹参川芎嗪干预后，可以有效地提高左心室射血分数，保护了心脏功能。左室短轴缩短率是左心室收缩功能的指标参数，当左室短轴缩短率＞25%时为左心室收缩功能正常，当低于25%时为左心室收缩功能受损。我们研究发现，丹参川芎嗪可以有效提高FS值，降低了心肌梗死对于左心室收缩功能的损伤，并且可以有效降低cTnI的表达。

综上所述，丹参川芎嗪可以有效改善心肌缺血程度，调节心肌供血，降低心肌梗死对左心室收缩功能的损伤，降低cTnI保护心脏功能，而其可能机制是通过提高超氧化物SOD的表达，降低MDA达到抗氧化的作用。

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济南市卫生科技发展计划项目（No.2014-11）