谢有志 ，华蕊 ，刘仙喜 ，杨慧 ，吴科榜

（1.海南省畜牧技术推广总站，海南 海口 570203；2.海南大学，海南 海口 570228）

海南黑毛和牛发情周期中生殖激素分泌规律研究

谢有志1，华蕊2，刘仙喜1，杨慧2，吴科榜2

（1.海南省畜牧技术推广总站，海南 海口 570203；2.海南大学，海南 海口 570228）

本试验以发情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛为试验动物，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA 法）测定其血清中促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）和孕酮（P4）的含量，对这些生殖激素的分泌规律进行研究。结果表明：FSH与LH分泌趋势基本一致，从发情期到妊娠期再到休情期呈现逐渐下降趋势；E2在进入妊娠期后分泌量显著减少，休情期时变化不大；PRL在妊娠期的分泌水平显著高于非妊娠期（P＜0.05）；P4的分泌水平从发情期到妊娠期显著上升（P＜0.05），进入休情期逐渐下降。

海南黑毛和牛；生殖激素；分泌规律

海南和牛又称海南黑毛和牛，是海南省引进日本纯种和牛胚胎以海南本地黄牛（雷琼牛）为母体进行胚胎移植得到的和牛品种，是优良的地方肉牛品种[1]。生殖激素对海南黑毛和牛的繁殖育种起着重要作用。促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）、孕酮（P4）等激素之间互相协调，影响着生殖细胞的发生、发育、释放和发情的周期性变化[2]。本试验以发情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛为试验对象，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA法）对其血清中的生殖激素水平进行测定与分析，研究整个发情周期中5种生殖激素的分泌规律。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 FSH、LH、PRL、E2、P4 5种激素的ELISA检测试剂盒，购自苏州卡尔文生物科技有限公司。

1.1.2 主要仪器 离心机，恒温培养箱，酶标仪。

1.1.3 试验母牛 由海南畜牧技术推广总站海南肉牛品种改良示范基地提供，选取体态健康、发育良好的海南黑毛和牛30头，其中处于发情期、妊娠期、休情期的各10头。

1.2 方法

1.2.1 血清制备 对试验母牛进行颈静脉采血，将全血样品静置2h，期间防止剧烈震动以防溶血。待全血凝固并析出血清后，用离心机5000r/min离心10min，取上清液，标记并分装，置于-20℃冰箱保存待用。

1.2.2 血清中FSH、LH、PRL、E2、P4的测定 采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）进行测定，具体操作详见试剂盒说明书。根据酶标仪得到休情期、发情期、妊娠期的 PRL、FSH、LH、E2、P4 所对应的OD450值，绘制标准曲线，并按曲线方程计算各样本浓度值。

1.3 数据分析 采用SPSS 16.0软件ANOVA法对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准误（SEM）”表示，组间差异显著性检验用Duncan法进行多重比较。

2 结果与分析

海南黑毛和牛发情周期中5种不同生殖激素的分泌水平列于表1。

2.1 血清中FSH分泌水平的变化 根据图1可知，试验母牛血清中FSH分泌水平在发情期最高，达到5.19IU/L；配种成功后进入妊娠期，FSH的分泌水平逐渐下降至4.12IU/L，休情期血清中FSH的含量为3.74IU/L。发情期母牛血清中的FSH分泌水平显著高于休情期（P＜0.05），妊娠期母牛血清中的FSH含量与休情期、发情期比较无显著差异（P＞0.05）。

表1 海南黑毛和牛血清中不同生殖激素分泌水平

图1 血清中FSH分泌水平的变化

2.2 血清中LH分泌水平的变化 由图2可知，试验母牛整个发情周期中LH的分泌水平呈下降趋势，发情期血清中的LH分泌水平最高，为4.71mIU/mL；妊娠期和休情期血清中的LH含量分别为4.53、4.17mIU/mL；三个时期两两比较，LH分泌水平无显著差异（P＞0.05）。

图2 血清中LH分泌水平的变化

图3 血清中E2分泌水平的变化

2.3 血清中E2分泌水平的变化 如图3所示，发情期血清中E2的分泌水平显著高于休情期和妊娠期（P＜0.05），达到 50.21 pg/mL；进入妊娠期后 E2含量显著下降至 41.99 pg/mL（P＜0.05）；休情期母牛血清中E2的含量变化不大，为41.29pg/mL。

图4 血清中PRL分泌水平的变化

2.4 血清中PRL分泌水平的变化 由图4可以看出，试验母牛发情期血清中的PRL含量为415.70ng/mL；配种成功进入妊娠期后，血清中的PRL分泌水平急剧上升至538.30ng/mL，显著高于休情期和发情期（P＜0.05）；休情期 PRL含量下降至459.70ng/mL。

2.5 血清中P4分泌水平的变化 根据图5可知，发情期母牛血清中的P4含量最低，进入妊娠期后母牛血清中的P4含量从0.28ng/mL显著升高至9.49ng/mL（P＜0.05）；休情期P4分泌水平下降为5.51ng/mL。

图5 血清中P4分泌水平的变化

3 讨论

3.1 发情周期中血清FSH和LH分泌水平的变化 促卵泡素（FSH）又叫卵泡刺激素，促黄体素（LH）又叫黄体生成素，二者都是由垂体的嗜碱性细胞合成并分泌的糖蛋白激素。FSH主要促进卵巢发育、提升卵巢质量，促使卵泡颗粒细胞的增加和卵泡液的产生。LH的主要作用是诱导排卵，促进黄体生成。由表1可以看出，母牛血清中的FSH含量从发情期到妊娠期下降，进入休情期后持续下降。这一趋势与李成娇等[3]的研究结果一致。但本试验中发情期母牛血清中的LH含量与休情期、妊娠期的差异不显著，可能是因为饲养水平和营养状况影响了激素的分泌水平，还有可能是由于卵巢分泌E2和P4对FSH和LH进行负反馈调节造成的。

3.2 发情周期中血清E2分泌水平的变化 雌激素主要成分为雌二醇，由卵巢的卵泡细胞分泌。主要功能是促进雌性动物附性器官成熟及第二性征出现，维持发情周期的变化和生殖活动[4]。本研究中，试验母牛从发情期到妊娠期血清中的E2含量显著下降，进入休情期后E2含量变化不大。进入妊娠期后，卵巢生理活动减少引起雌二醇分泌水平下降。

3.3 发情周期中血清PRL分泌水平的变化 催乳素是由垂体前叶的催乳细胞合成分泌的蛋白质激素，除此之外，胎盘、淋巴细胞、皮肤也可分泌少量[5]。主要作用是促进乳腺发育生长，刺激并维持泌乳，还有刺激卵泡LH受体生成等作用。由表1可看出，海南黑毛和牛妊娠期的PRL浓度显著高于非妊娠期，与文献报道的相符[6]。

3.4 发情周期中血清P4分泌水平的变化 孕酮主要由黄体、胎盘及肾上腺皮质合成并分泌。它有利于受精卵着床还可以协同催乳素作用于乳腺导管系统，刺激乳腺发育。本试验中，发情期母牛血清中的P4含量最低，进入妊娠期后母牛血清中的P4含量显著升高，休情期的P4分泌水平又下降。

4 小结

本试验探明了海南黑毛和牛发情周期中生殖激素的分泌规律：FSH与LH分泌趋势基本一致，从发情期到妊娠期再到休情期呈现持续下降趋势；E2在妊娠期的分泌量显著减少，休情期时变化不大；PRL在妊娠期的分泌水平显著高于非妊娠期；P4的分泌水平从发情期到妊娠期显著上升，进入休情期逐渐下降。

[1] 刘圈炜，孙瑞萍，魏立民，等.维生素A对海南和牛抗氧化指标及血液生化指标的影响[J].中国畜牧兽医，2012，39（9）：110-113.

[2] 宋先忱，张兴会，赵艳娇.生殖激素在绒山羊繁殖方面的应用[J].黑龙江动物繁殖，2011，19（4）：37-39.

[3] 李成娇，王宏娟，朱晓玲.吉林地方特色肉牛发情周期内生殖激素变化规律研究[J].安徽农业科学，2010（17）：9018-9020.

[4] 谢炳坤.广西黄牛和水牛发情周期血清生殖激素变化规律的研究[D].南宁：广西大学，2005.

[5] 徐文军.河西绒山羊血清中PRL和T3浓度季节变化与绒生长的相关分析[D].兰州：甘肃农业大学，2008.

[6] 唐金凤，朱鋐达，郁忠勤，等.妊娠期雌二醇和催乳素与瘦素的关系[J].上海第二医科大学学报，2001，21（1）：44-46.

Study the Secretion Law of Reproductive Hormones on Hainan Black Wagyu

Xie Youzhi1，Hua Rui2，liu Xianxi2，et al.
（1.Livestock Technology Extension Station of Hainan Province Hainan Haikou 570203；2.Hainan University，Hainan Haikou 570228，China）

In this study，Hainan black wagyu were used as experimental animals which during the estrus，pregnancy and leisure period，and the secretions of follicle-stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH），estradiol（E2），prolactin（PRL） and progesterone（P4） were measured by enzyme linked im munosorbent assay（ELISA）.The results showed that the secretions of FSH and LH from estrus to pregnancy and then to the leisure period had a gradual downward trend，their secretion trends were the same basically.E2 decreased significantly after entering the pregnancy period and had a little change during the leisure period（P＜0.05）.The secretion level of PRL during pregnancy was significantly higher than that of nonpregnancy（P＜0.05）.The secretion level of P4 increased significantly from estrus to pregnancy，and gradually decreased during the leisure period（P＜0.05）.

Hainan black wagyu；Reproductive hormones；Secretion law

S814.1

B

1001-8964（2017）12-0032-03

2017-08-10

谢有志（1968-），男，硕士，高级畜牧师，主要研究海南黑毛和牛的生长与繁殖。