王钢，廖娟，喻世刚，张鑫焱，谢能君，姚彩霞

（乐山师范学院生命科学学院，四川 乐山 614004）

乐山市定点屠宰生猪圆环病毒2 型感染情况调查

王钢，廖娟，喻世刚，张鑫焱，谢能君，姚彩霞

（乐山师范学院生命科学学院，四川 乐山 614004）

为了解乐山市定点屠宰生猪的猪圆环病毒2型（PCV2）感染情况，本试验对2016年6月～2017年5月收集的生猪脾脏采用PCR快速检测方法进行PCV2病毒DNA检测。结果显示：乐山市定点屠宰生猪PCV2的阳性检出率为68.12%，感染较为严重。

屠宰生猪；猪圆环病毒2型；PCR检测

猪圆环病毒（PCV）在分类学上属圆环病毒科、圆环病毒属，其基因组为单股环状DNA，由20面体对称的蛋白衣壳包裹，平均直径约17±1.3nm，是目前发现的最小的动物病毒之一[1-2]。猪圆环病毒病最早在20世纪90年代初发现于加拿大，1996年在欧洲一些国家暴发，现在在世界上普遍流行。2001年我国首次报道PCV2感染，之后该病在我国的流行呈逐年上升趋势[3]。李瑞香[4]研究表明，种猪对PCV2的感染率达67%，育肥猪感染率为64.71%。本试验应用PCR技术对2016年6月～2017年5月随机收集的乐山市某定点屠宰场生猪的脾脏进行PCV2检测，现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 PCV2组织样品来源 2016年6月～2017年5月期间，从乐山市高新区车子镇黎明屠宰场采集160份不同类型猪群的脾脏，每份样品采集5g，分别置于5mL塑料管中-80℃保存。

1.1.2 试剂 猪圆环病毒2型PCR检测试剂盒，购自深圳市康百得生物科技有限公司。

1.1.3 仪器 BD-3000凝胶成像分析系统，Select Cycler 2 Thermerl Cycler、Select Spin17R 微型冷冻离心机。

1.2 方法

1.2.1 病毒DNA的提取和PCR检测 猪圆环病毒2型病毒DNA的提取和PCR检测，按试剂盒说明书方法进行。

1.2.2 电泳 将PCR产物用3%琼脂糖凝胶电泳后，于紫外线下观察、拍照并记录结果。

1.2.3 TA克隆与转化 随机将一阳性PCR产物克隆至pEASY-T3 Cloning Vector，并转化至Trans1-T1感受态细胞中。将经PCR鉴定为阳性的克隆产物于4℃冰箱中保存。

1.2.4 PCR产物的序列测定 将PCR阳性克隆产物送至成都擎科梓熙生物技术有限公司进行序列测定，并将测定的序列与NCBI数据库比对分析。

2 结果

2.1 PCV2 PCR扩增结果 猪圆环病毒2型部分PCR产物凝胶电泳检测结果，见图1、图2。分析表明，160份样品中检出PCV2阳性样品109份，阳性率为68.12%。

2.2 序列分析 将测得的序列与NCBI数据库进行分析和比较，发现其与目的基因PCV2相应序列的同源性最高（＞99%）。说明本方法检测可行，结果基本可信。

图1 2016年部分临床组织样品PCR检测结果

图2 2017年部分临床组织样品PCR检测结果

3 小结与分析

3.1 检测结果显示PCV2病毒在四川省乐山市的感染率较高。赵军等[5]对四川省13市部分猪场的疑似病例进行PCV2病原检测，阳性率达到71.55%，其中阳性率最高的达88.89%。邓静等[6]对2010～2013年四川省11个城市的猪圆环病毒2型疑似病例进行PCV2病原检测，阳性率达到70.7%，其中乐山市阳性检出率高达100%。本研究从乐山市定点屠宰场采集脾脏样品，检出PCV2阳性率高达68.12%，明显高于其他地区，说明PCV2在乐山地区感染比较严重。

3.2 PCV2的主要易感动物是猪，各种年龄、不同性别的猪都可以感染。由于PCV2对外界环境抵抗力极强，部分外观健康的肥猪带毒但未发病，成了潜在的重要的传染源。各级兽医主管部门和技术人员应当向养殖户普及PCV2的防控知识，使养殖户自觉做好PCV2的免疫工作，这样才能减少该病的传播，降低经济损失。■

[1] 杨红菊，姜艳彬，王海，等.Ⅱ型猪圆环病毒流行病学研究进展及疾病诊断与防控[J].中国畜牧兽医文摘，2012，28（4）：101-103.

[2] 刘鸽，张培生，于会举，等.北疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型免疫抗体水平检测与分析[J].养猪，2016（5）：105-107.

[3] 甘孟侯，杨汉春.中国猪病学[M].北京：中国农业出版社，2005：440-461.

[4] 李瑞香.规模化猪场猪圆环病毒2型的血清流行病学调查[J].动物医学进展，2017，38（3）：129-132.

[5] 赵军，周桐枫，刘鹏娟，等.四川地区腹泻仔猪群猪圆环病毒Ⅱ型分子流行病学调查[J].中国预防兽医学报，2016，38（7）：546-549.

[6] 邓静，赵春荣，曹三杰，等.2010～2013年四川地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查[J].中国兽医学报，2014，34（12）：1868-1876.

Infection Investigation of Porcine Circovirus Type 2 in Leshan Pigs Slaughterhouses

Wang Gang，Liao Juan，Yu Shigang，et al.

（College of Life Sciences，Leshan Normal University，Sichuan Leshan 614004，China）

In order to investigate the infection of porcine circovirus type 2（PCV2） in Leshan pigs slaughterhouses，the samples of slaughter pig,s spleen were collected from June 2016 to May 2017.PCR method was used to detect PCV2 DNA.The results showed that the positive rate of PCV2 was 68.12%，its prevalence in Leshan area was serious.

Slaughter pig；Porcine circovirus type 2；PCR detection

S851.313

B

1001-8964（2017）12-0030-02

2017-10-20

四川省教育厅资助科研项目（16CZ0031）；乐山市重点科研项目（15NCXY121）

王钢（1979-），男，重庆綦江人，副教授，硕士研究生，主要从事预防兽医学与农业废弃物资源利用研究。