李俐睿，李敏，周潇潇，李桂黎，肖金鹏，岳建国

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

2016年成都市猪O型口蹄疫免疫抗体监测与分析

李俐睿，李敏，周潇潇，李桂黎，肖金鹏，岳建国

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

为评估成都市猪群中O型口蹄疫的免疫效果，从成都地区采集2005份猪血清样品用ELISA方法进行O型口蹄疫病毒免疫抗体检测。结果显示：规模化猪场、散养户和屠宰场受检样品的免疫抗体合格率分别为 85.25%（422/495）、81.80%（499/610）和 83.44%（751/900），免疫抗体平均合格率为 83.39%（1672/2005），其中规模化猪场的免疫抗体合格率稍高于散养户。

O型口蹄疫；免疫抗体；监测

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的动物急性、热性、高度接触性传染病，主要感染牛、猪等偶蹄类动物，临床典型特征为口舌黏膜、皮肤、蹄部形成糜烂、溃疡病灶。该病对养殖业的危害极大，曾被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病之首[1]，我国将其列为一类疫病，是强制免疫病种。

为有效做好该病的防疫工作，成都市于每年2月和8月给管辖的15个区（市）县发放猪O型口蹄疫疫苗，进行春秋两季集中免疫，为跟踪了解免疫效果，我们分别在2016年5月和11月对所有发放该疫苗的区（市）县的部分规模化养猪场、散养户和屠宰场的猪只进行血清样品采集和O型口蹄疫病毒免疫抗体水平监测。现报告如下：

1 材料

1.1 检测试剂 武汉科前生物股份有限公司猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒，批号：160403。

1.2 样品 血清样品采集自成都市管辖的15个区（市）县的规模化猪场、散养户和屠宰场，共计2005份。

2 方法

2.1 准备

2.1.1 使用前将所有试剂平衡至室温。

2.1.2 样品、对照血清和洗涤液的稀释 样品稀释：在血清稀释板中按1∶32的体积稀释待检血清样品（155μL样品稀释液中加入5μL待检血清样品）。

对照血清稀释：在血清稀释板中按1∶4分别稀释阳性对照和阴性对照（180μL样品稀释液中加入60μL对照血清）。

洗涤液稀释：摇匀洗涤液后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

2.2 检测步骤

2.2.1 取抗原包被板，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置3min倒掉液体，并在吸水纸上拍干，共计洗板2次。再分别将稀释好的待检血清和对照血清各100 μL加入到抗原包被板孔中，待检样品设1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，轻轻振匀孔中样品，置37℃温育30min。

2.2.2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置3min倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。

2.2.3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μL，置37℃温育30min。

2.2.4 洗涤5次，方法同2.2.2。

2.2.5 每孔先加底物液 A 50 μL，再加底物液B 50μL，混匀，室温（18～25℃）避光显色 10min。

2.2.6 每孔加终止液50μL，10min内测定结果。

2.3 检测结果判定 在酶标仪上测各孔的OD630nm值。试验成立的条件为阳性对照平均OD630nm值与阴性对照平均OD630nm值之差小于0.5。

3 结果

2016年全年共检测免疫猪O型口蹄疫血清2005份，其中合格1672份，平均合格率为83.39%。春季防疫检测平均合格率为82.87%，秋季防疫检测平均合格率为83.88%。详见表1。

表1 2016年成都市猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果份

3.1 规模场检测结果 在495份规模场猪血清中，合格422份，平均合格率为85.25%。春季防疫检测平均合格率为84.00%，秋季防疫检测平均合格率为86.30%。

3.2 散养户检测结果 在610份散养户猪血清中，合格499份，平均合格率为81.80%。春季防疫检测平均合格率为81.00%，秋季防疫检测平均合格率为82.58%。

3.3 屠宰场检测结果 在900份屠宰场猪血清中，合格751份，平均合格率为83.44%。春季防疫检测平均合格率为83.56%，秋季防疫检测平均合格率为83.33%。

4 分析与结论

4.1 口蹄疫O型为全世界流行最广的一个血清型，且无有效的治疗方法，接种疫苗是阻止该病发生、阻断疫病流行和潜伏感染最有效的手段。如何进行科学免疫是目前防控该病的重点，而影响免疫效果的因素很多，疫苗运输和存放的环境温度是否正确，接种疫苗操作是否规范，制定的免疫程序是否合理等都会影响免疫效果。为评估成都市春防和秋防后O型口蹄疫病毒免疫的效果，对2005份不同来源的猪血清样品进行了O型口蹄疫病毒抗体检测，其中检出阳性1672份，平均免疫合格率为83.39%，达到了O型口蹄疫免疫抗体平均合格率应在70%以上的标准，符合农业部的规定。表明成都市在春秋防疫工作中对猪O型口蹄疫的强制免疫工作基本达到了预期效果。从表1还可以看出，规模场的免疫效果明显好于散养户，这可能与规模场的规范化养殖，严格的免疫程序以及较高的免疫操作水平等有关。

4.2 对于重点防疫地区，要重视加强免疫的作用。加强免疫后抗体上升幅度大，抗体持久稳定[2]。有研究表明，仔猪通过母乳获得保护性抗体，但母源抗体随日龄的增加而逐渐衰减[3]。仔猪进行口蹄疫免疫的首免时间在30日龄左右，但周莹等[4]补充指出，散养户仔猪首免可在30日龄左右，而规模化猪场的最佳首免时间在45～50日龄。家畜免疫后一般15d开始产生抗体，一个月后的抗体水平到最高值，但高水平抗体效价维持时间较短，很难达到半年的保护期，加强免疫能有效提高保护率，延长免疫的持续期[5]。在规模化养殖中，尤其要重视对种猪的免疫。种猪免疫后其后代产生免疫抗体较快，免疫水平也较高；未经免疫或免疫不规范的母猪所产仔猪则反之[6]。

4.3 需要注意的是，本次监测的2005份猪血清样品中，抗体阳性率虽然都在80%以上，但是尚未出现达100%免疫合格率的猪群。鉴于口蹄疫病毒高度接触性传染的性质和巨大危害，仍需要认真分析防疫过程中出现的各种问题，重视和加强口蹄疫的免疫接种工作，切实根据《2017年国家动物疫病强制免疫计划》文件要求做好强制免疫工作，动物卫生监督机构还要依法对不履行强制免疫义务的养殖单位和个人进行处置。同时定期培训区（市）县的基层防疫员，让他们了解最新的国际和国内动物疫病流行态势，学习最新最科学的免疫程序，宣传推广口蹄疫防疫知识，最终提升免疫抗体合格水平。■

[1] OIE.Manual of standards for diagnostic tests and vaccines[Z].4th Edition，2000.

[2] 宁华杰，周莹，柳斌，等.长沙市猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫生猪后抗体消长规律及免疫程序的研究[J].中国动物检疫，2009，26（10）：58-59.

[3] 谢琴，李元刚，张明林，等.宁夏某规模化猪场猪瘟、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析[J].甘肃畜牧兽医，2005，185（6）：8-10.

[4] 周莹，王辉，王兰平，等.仔猪O型口蹄疫母源抗体消长试验[J].安徽农业科学，2008，36（7）：2770-2771.

[5] 孟国庆，王薇，张继红，等.口蹄疫加强免疫在实际工作中的重要性[J].疫病防治，2009，26（3）：57.

[6] 金大春，王跃川，季旭仁，等.猪口蹄疫免疫程序和抗体水平研究生产管理[J].畜禽业，2003，30（8）：30-31.

Monitoring and Analysis of Immune Antibodies on Foot and Mouth Disease Type O of Pigs in Chengdu in 2016

Li Lirui，Li min，Zhou Xiaoxiao，et al.

（Animal Disease Prevention and Control Center of Chengdu City，Sichuan Chengdu 610041，China）

This experiment was to evaluate the immune effect of foot and mouth disease type O of pigs by ELISA method in Chengdu.2005 samples were collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses.The results showed that the immune antibody qualified rate of large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were 85.25%（422/495），81.80%（499/610）and 83.44%（751/900），respectively，the average immune antibody qualified rate was 83.39%（1 672/2 005），and the large-scale pig farms,immune antibody qualified rate was slightly higher than that of the scatter-feed households.

Foot and mouth disease type O；Immune antibody；Monitoring

S851.313

B

1001-8964（2017）12-0027-03

2017-08-30

李俐睿（1986-）女，四川成都人，兽医师，硕士，现在成都市动物疫病预防控制中心从事实验室检测工作。