方 晨，韦祥相，张 钊，李贤梅，张小雪

( 贵州大学 动物科学学院 水产系，贵州 贵阳 550025 )

玻璃化冻存对斑马鱼卵母细胞的影响

方 晨，韦祥相，张 钊，李贤梅，张小雪

( 贵州大学 动物科学学院 水产系，贵州 贵阳 550025 )

采用比色法测定了在不同玻璃化冻存液中冻存1、2、4、8 d时斑马鱼卵母细胞中谷胱甘肽含量和三磷酸腺苷酶的活性，以研究玻璃化冻存对卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性的影响。试验结果显示，V4组斑马鱼(玻璃化液组分是：1.5 mol/L甲醇、6.0 mol/L乙二醇、0.25 mol/L蔗糖)卵母细胞冻存1、2、4、8 d后存活率最高[分别为(48.89±2.58)%、(39.35±1.34)%、(24.18±2.32)%和(14.56±1.64)%]，显著高于其他组。经玻璃化冻存后，斑马鱼卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性均随冻存天数的增加而显著下降(P<0.05)。V4组的谷胱甘肽含量[(13.37±0.59) mg/g]和线粒体三磷酸腺苷酶活性较高，线粒体Ca2+-三磷酸腺苷酶[(3.823±0.144) U/mg]、Mg2+-三磷酸腺苷酶[(4.503±0.144) U/mg]和Na+/K+-三磷酸腺苷酶[(7.520±0.198) U/mg]活性最高。各组细胞的活性随着冻存天数的增加而逐渐下降。试验结果表明，玻璃化冻存不能完全避免低温和冷冻保护剂的毒性和对卵母细胞的损伤。

斑马鱼；卵母细胞；玻璃化冻存；谷胱甘肽；线粒体三磷酸腺苷酶

斑马鱼(Daniorerio)原产于印度东部、巴基斯坦、缅甸以及孟加拉国的小溪、稻田及恒河中游地区，是一种常见的热带观赏鱼[1]。斑马鱼为重要的脊椎动物模式系统之一, 具有养殖水体小、成本低、繁殖周期短、产卵量大、品系资源丰富等特点及其他模式脊椎动物所不具备的胚胎体外受精、体外发育、胚体透明等优势，已成为生命科学研究的新宠[2]。目前已对斑马鱼的胚胎发育、毒理、营养、生长、细胞分子等进行了广泛研究[3-9]，但尚未见到有关玻璃化冷冻对斑马鱼卵母细胞谷胱甘肽含量和三磷酸腺苷酶活性的研究。

玻璃化冻存技术是近年来发展的一项新兴技术，是超低温保存技术中保存效果较好的一种方法。……