钟柏林，蔡璐，刘二秀，张功亮，王志

（江西省瑞金市妇幼保健院，江西 瑞金 342500；2.赣州市人民医院，江西 瑞金 342500）

宫颈癌中STING的表达及意义

钟柏林1，蔡璐2，刘二秀2，张功亮2，王志2

（江西省瑞金市妇幼保健院，江西 瑞金 342500；2.赣州市人民医院，江西 瑞金 342500）

目的 对宫颈癌患者的癌变部位及其正常的癌旁组织中进行检测干扰素刺激基因（STING）水平，探讨分析对其表达情况及其临床影响。方法 对医院筛选纳入的60例宫颈癌患者的癌组织及其相应的癌旁组织（癌旁组），采用免疫组织化学法检测及荧光实时定量PCR技术分别对其组织中STING及下游通路相关基因表达情况进行分析。结果 与矮胖组织相比，在癌变组织中STING表达呈现明显下降趋势，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。在癌部组织中STING下游基因TBK-1及IRF-3的表达均明显降低于其相应的癌旁正常组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 在癌病灶组织内STING及下游通路相关基因较正常上皮细胞者呈现出低表达状态，其变化水平可能与癌病变程度有一定相关，在临床治疗中具有参考价值。

STING；基因；宫颈癌；表达；意义

宫颈癌是常见的妇科肿瘤，我国是宫颈癌的高发地区，每年新增约13.15万例，其中约5.3万例死于该病，因此宫颈癌是我国重点研究的疾病之一。人乳头瘤病毒（HPV）是一种重要的致瘤DNA病毒，可引起人生殖道和肛门皮肤、黏膜产生良性和恶性肿瘤，其中与宫颈癌发病密切相关的有HPV16、18等。在对宫颈癌发生和发展因素研究中发现，HPV在宫颈癌发生过程中起着重要作用。干扰素（IFN）一般被认为参与机体的抗病毒固有免疫反应，也可以通过IFN刺激基因在抗微生物感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用[1]。而干扰素刺激基因（STING）作为DNA感受路中的重要分支，能够感受胞质游离的dsDNA，进而调控IFN和多种炎性因子及趋化因子的分泌[2]。

目前国内暂没有对宫颈癌中STING的研究，故本课题研究探讨STING在宫颈癌组织及其对应癌旁组织中的表达及其临床诊断意义，为宫颈癌早期诊断提供良好标记物检测。对STING及下游IFN通路相关基因TBK-1和IRF-3在宫颈癌组织中的表达情况分析，探讨STING作为宫颈癌肿瘤标记物的潜在诊断意义[3]。因此本文通过测定STING及下游基因在宫颈癌患者体内中的表达状态，对其临床治疗提供积极的指导意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 依据临床资料确定为宫颈癌，入选患者均符合诊断标准，经病理科对其病理类型证实，经筛选后纳入女性患者60例，年龄19～65岁，平均（53.1±7.3）岁，收集宫颈癌组织和对应癌旁黏膜上皮组织。所有患者经院伦理委员会通过审批，并在知情同意书签字。本次研究所选取患者均需符合以下要求：研究组患者经取材活检病理检查确诊为宫颈癌；研究组患者未经手术、放化疗。满若有以下几项中任一项者均需排除：合并心肝肾等其他系统疾病者；有精神疾患的患者；不愿意参加本次研究的患者。

1.2 方法[4-5]采用免疫组化技术检测其中STING的表达；

培养宫颈癌细胞系hela细胞和正常角细胞HaCaT细胞；提取其RNA，采用荧光实时定量PCR技术检测其中STING及下游IFN通路相关基因TBK-1和IRF-3的表达，具体操作如下。

1.2.1 细胞培养 宫颈癌细胞系hela细胞和正常角细胞HaCaT细胞在DMEM/F12培养基，10%的胎牛血清中于37℃、含体积分数为5%二氧化碳（CO2）饱和湿度恒温细胞培养箱中培养，每天观察生长情况。待细胞长至对数生长期并传代至足够数量时，冻存一管，准备实验。

1.2.2 免疫组织化学（IHC）染色 收集标本采用对其STING免疫组织化学染色。采用免疫组化法检测基因的表达。所有标本均采用10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，对切片进行免疫组化，所有操作步骤均严格按照说明书进行。

1.2.3 荧光-定量PCR术 切取1～2 mm大小组织，利用通用型免疫组化试剂盒（上海基因科技），使用磁珠法提取组织mRNA，用试剂盒逆转录成cDNA（-20℃储存备用），再用Light CyclerR480 SYBRGreenⅠMaster进行扩增，采用10μL反应体系SYBR GreenⅠMaster 5μL，上下游引物4.0μL，模板1μL。反应条件为:预变性95℃，1 min；变性95℃，10 s；退火65℃，30 s，共64个循环。每个样品3个复孔，取平均值。

1.3 统计学方法 对所得结果使用SPSS 14.0统计软件进行比较分析，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，组间率（%）的比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 STING基因在宫颈癌癌组织及其癌旁组织中的表达在筛选出的60例宫颈癌组织及癌旁组织STING基因表达分别为（0.11±0.09）及（0.32±0.14），TBK-1基因表达分别为（0.29±0.12）及（0.74±0.25），可知在癌组织细胞中呈现低表达状态。与癌旁组织相比，癌组织明显低于癌旁正常组织中的表达，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 基因的表达结果（x±s）

2.2 在不同组织内IRF-3 mRNA表达 在筛选出的60例宫颈细胞癌及癌旁正常组织IRF-3表达分别为（0.11±0.09）、（0.32±0.14），组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。而在正常角细胞系HaCaT细胞及癌细胞系hela细胞中表达水平分别为（0.148±0.023）、（0.092±0.011），见表2。

表2 基因的表达结果（x±s）

3 讨论

宫颈癌是作为女性生殖器中最常见的一种恶性肿瘤，其在女性的发病率仅次于乳腺癌，对女性的身心健康和生活造成了严重的威胁，也是造成癌症女性死亡的主要诱因。发病率逐年呈现大幅度增高的趋势。目前对于宫颈癌的具体发病机制尚不十分清楚，多数学者认为其发生发展的过程受多种因素的共同影响，而宫颈癌的浸润、转移是多阶段、多因素、多基因综合作用和长时间的发展而产生的结果[6-7]。宫颈癌为国家大病救治的重点疾病，若能早期在对其作出预测、诊断，对宫颈癌的治疗及预后无疑是一项重大的进步，可以为国家节约治疗费用，具有良好的经济效益[8]。尤其中国是宫颈癌的高发国家，侧重在农村，恶性肿瘤重在预防，尽快找到宫颈癌早期诊断的指标是关键，可以提早发现，达到早期治疗宫颈癌的目的，从而提高治愈率，具有良好的社会效益[9]。

在本研究中结果显示，宫颈癌癌组织与正常癌旁组织的STING基因、TBK-1、IRF-3表达水平比较发现，癌患者的STING基因及INF下游通路相关基因明显低于正常组织患者（P＜0.05），为后其临床治疗提供一定的指导意义。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.35.039

赣州市指导性科技计划项目课题（GZ2016ZSF357）