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·论著·

EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究

张俊彦，梅玲玲，徐昌平，占利，陈鸿鹄，张云怡，陈建才，张政，杨勇

目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术，建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料，15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55 cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥ 99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21，最高29.38，而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10 h左右，而常规分离培养方法需要5～7 d。结论EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法，可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。

单增李斯特菌；活菌；叠氮溴化乙锭(EMA)；实时荧光PCR技术

单核细胞增生李斯特菌可引起新生儿、老年人和免疫缺陷病人脑膜炎、败血症，孕妇流产等疾病，死亡率高达20%～30%。该菌主要通过食物传播[1-3]。近年来，因该菌引发疾病所导致死亡和孕妇流产的报道有所增加[4]。……