魏 斌，田一男，李 平，石 梅，曹雪峰，肖启程，涂 蕊，但佳明，杨亭玉，彭广能，钟志军，*

(1.四川农业大学 动物医学院 动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130； 2.邛崃市农业和林业局，四川 邛崃 611530； 3.绵阳市经开区动物疫病预防控制中心，四川 绵阳 621000)

犬瘟热病毒原液TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

魏 斌1，田一男1，李 平2，石 梅3，曹雪峰1，肖启程1，涂 蕊1，但佳明1，杨亭玉1，彭广能1，钟志军1，*

(1.四川农业大学 动物医学院 动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130； 2.邛崃市农业和林业局，四川 邛崃 611530； 3.绵阳市经开区动物疫病预防控制中心，四川 绵阳 621000)

为建立一种不提取病毒RNA，直接采用TaqMan荧光定量RT-PCR检测样本上清液中犬瘟热病毒的方法。通过扩增CDV的NP基因部分片段构建重组质粒，建立TaqMan荧光定量PCR方法，对所建立的方法进行特异性、敏感性、重复性检测；比较了提取核酸后进行荧光定量RT-PCR与不提取核酸对原液进行荧光定量RT-PCR检测的结果，最后对疑似CDV病料进行检测。结果显示，建立的CDV质粒TaqMan荧光定量PCR检测灵敏度比普通PCR灵敏度高1 000倍。将核酸提取液和病毒原液稀释后用该研究建立的方法进行检测，最小检测稀释倍数分别为107和105，表明提取核酸后样本中的有效cDNA浓度比直接使用病毒原液检测高100倍。特异性和重复性检测结果表明，该方法特异性良好且重复性较高。对97份临床病料进行检测，建立的方法共检出60份阳性，阳性检出率高于普通RT-PCR和胶体金快速检测试纸板，提取核酸法与原液法的一致率为100%。……