宋梦阳 王方圆 侯晋 殷学民

SACC-83来源的外泌体调节唾液腺间质成纤维细胞表达FAP的实验研究

宋梦阳 王方圆 侯晋 殷学民

目的研究腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)细胞SACC-83来源的外泌体(exosome，EXO)对人正常唾液腺间质成纤维细胞(human normal salivary gland stromal fibroblasts，hSGSFs)表达成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的影响。方法采用超滤管浓缩与EXO提取试剂盒相结合的方法从SACC-83的培养上清中提取EXO，通过透射电镜及Western Blot对所提取的EXO进行鉴定；将SACC-83来源的EXO用荧光染料PKH67标记后与hSGSFs共培养48 h，采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hSGSFs对于SACC-83来源的EXO的摄取情况；利用qRT-PCR和Western Blot法检测在SACC-83来源的EXO作用下，hSGSFs中FAP的表达变化。结果SACC-83培养上清中所提取到的微囊泡直径为30～100 nm，EXO的膜蛋白标记物CD63和TSG101的表达为阳性；携带PKH67荧光标记的EXO可被hSGSFs摄取，并可在mRNA和蛋白水平上调hSGSFs中FAP的表达。结论SACC-83来源的EXO可被hSGSFs摄取，并可显著上调hSGSFs中FAP的表达。提示ACC可能通过EXO途径促进正常唾液腺间质成纤维细胞向癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAF)的转化。

腺样囊性癌； 外泌体； 成纤维细胞活化蛋白； 癌症相关成纤维细胞

外泌体(exosome，EXO)是指由细胞内多泡小体(MVBs)与细胞质膜融合并把其内含小泡分泌至细胞外的一类膜性生物小囊泡[1]。研究证实，EXO广泛存在于血液、唾液、尿液、乳汁以及羊水等多种体液中，而且所有体外培养细胞的培养上清中都含有EXO[2]。肿瘤细胞来源的外泌体(tumor exosomes, TEX)是指来源于肿瘤细胞并向外分泌至肿瘤微环境中的外泌体，由于其包裹着肿瘤细胞所产生的特异性肿瘤调控相关的蛋白质、mRNA 和ncRNA，并可将这些活性物质靶向性传递给间质细胞、内皮细胞、炎症细胞以及免疫细胞，通过影响受体细胞基因表型改变蛋白功能，达到促进肿瘤增殖、侵袭、转移以及免疫抑制的目的；……