王 吉，付 瑞，李晓波，王淑菁，王莎莎，李 威，秦 骁，巩 薇，岳秉飞，贺争鸣

(中国食品药品检定研究院，国家实验动物微生物遗传检测中心，北京 100050)

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用

王 吉，付 瑞，李晓波，王淑菁，王莎莎，李 威，秦 骁，巩 薇，岳秉飞*，贺争鸣

(中国食品药品检定研究院，国家实验动物微生物遗传检测中心，北京 100050)

目的建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5’ UTR区高保守区域基因作为靶基因，分别设计合成引物，建立双重BVDV RT-PCR方法，并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本。牛源样本和64份牛临床样本。结果建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒III型(BPIV3)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应；检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板最低浓度分别为每微升8.87 × 102拷贝和6.31 × 102拷贝，BVDV 1型和2型cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本，核酸阳性率分别为14.6%和29.7%。结论建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点，可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测。

牛病毒性腹泻病毒；RT-PCR；牛源样本

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)又称黏膜病病毒(mucosal disease virus，MDV)，属黄病毒科(flaviviridae)瘟病毒属(pestivirus)。病毒粒子大小为40～60 nm，为有囊膜单股正链RNA病毒[1-2]。BVDV可引起许多临床症状及疾病，包括繁殖障碍、呼吸综合征、先天性缺陷、肠炎、持续感染(PI)和黏膜病(MD)等，患牛表现发热、白细胞减少、腹泻、流产、黏膜糜烂溃疡等急性感染症状及小牛先天持续性感染等症状。……