赵西珍

(三门峡市中心医院 口腔科，河南 三门峡472000)

微小小单胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的定植研究

赵西珍

(三门峡市中心医院 口腔科，河南 三门峡472000)

目的观察慢性根尖周炎感染根管内微小小单胞菌的定植情况。方法选取在我院就诊的100例慢性根尖周炎患者的130颗患牙，根据治疗情况分为根管首次感染组(52例患者，68颗患牙)和根管再感染组(48例患者，62颗患牙)。采用16s rDNA PCR分析微小小单胞菌和牙髓优势致病菌在患牙标本中的检出率、微小小单胞菌与牙髓优势菌之间的相关性。结果首次感染组患者根管内微小小单胞菌检出率为47.1%，再次感染组中根管内微小小单胞菌检出率为9.7%，差异有统计学意义(Plt;0.05)；首次感染组和再感染组患者微小小单胞菌与牙髓卟啉单胞菌检出具有相关性(Plt;0.05)。结论微小小单胞菌在慢性根尖周炎感染根管中均有定植，与牙髓卟啉单胞菌存在相关性，可能为共生关系。

微小小单胞菌；牙髓优势菌；检出率；相关性

(ChinJLabDiagn,2017,21:1920)

以专性厌氧菌为主的根管内细菌感染是慢性根尖周炎发生的主要致病因素[1]。关于根管内微生物的分析一直是研究的热点，牙髓优势菌牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonasendodontalis)和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)大多从感染根管中分离出来，是一种与牙髓感染有特殊关系的革兰阴性菌。目前发现在慢性根尖周炎感染根管中也可检出微小小单胞菌(Parvimonasmicra)[2,3]。微小小单胞菌为革兰阳性小单胞属细菌，在口腔和全身化脓性感染部位中比较常见[4]。国外对该菌在慢性根尖周炎感染根管中定植情况做了较多研究，但国内开展的调查较少，缺乏详细的统计数据。本研究主要探讨该菌株和优势菌粪肠球菌、牙髓卟啉单胞菌、牙龈卟啉单胞菌两者之间的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2015年8月-2016年8月在我院就诊的100例慢性根尖周炎患者的130颗患牙，纳入标准：首次感染患者的诊断依据慢性根尖周炎诊断标准；再感染为根管治疗2年以上，患牙根尖周病变持续存在或患牙出现新根尖周病变；近1-3个月未服用抗生素；知情同意并签署知情同意书。排除患有全身系统性疾病，髓腔穿孔或暴露，患牙经过塑化或干髓治疗，探诊深度，附着丧失≥4 mm患者。根据治疗情况将患者分为根管首次感染组(52例患者，68颗患牙)和根管再感染组(48例患者，62颗患牙)。首次感染组男性36例，女性16例，年龄22-70岁，平均年龄(40.52±3.87)岁；再感染组患者男性28例，女性20例，年龄19-68岁，平均年龄(38.36±5.44)岁。两组患者性别、年龄等资料比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。

1.2标本采集

标本采集参照纪海等[5]报道的取样方法，患者用氯已定含漱，局麻后橡皮障隔离患牙，用3%过氧化氢和2.5%次氯酸钠消毒患牙后无菌球钻去髓质，髓腔再次消毒后取具有根尖病变的牙根作为标本采集对象。首次感染患者根管中用20号无菌纸尖插入根管中，1 min后将纸尖尖端10 mm处剪断放入含缓冲液的EP管，涡旋，-20℃冻存。再感染组患牙需用GG钻和K锉去除牙胶，其他步骤同上。20号无菌纸尖尖端10 mm剪断放入含缓冲液的EP管中为空白对照组。

1.3样本处理及PCR

样本于室温下解冻，按照美国Promega细菌基因组DNA提取试剂盒要求提取DNA，微量分光光度计测定浓度。

微小小单胞菌和牙髓优势菌粪肠球菌、牙髓卟啉单胞菌、牙龈卟啉单胞菌的菌种特性16S rDNA引物由上海生工生物技术有限公司合成。参考Cogulu 等[6]报道反应条件进行PCR试验，反应结束后凝胶电泳分析。微小小单胞菌RTFQ-PCR检测采用该菌种的特异性保守区域设计，β-actin为内对照，样本和管家基因分别在独立反应孔中扩增40个循环，反应结束后读取溶解曲线。

1.4统计学分析

收集的资料采用SPSS 17.0统计软件数据包进行分析，两个独立样本资料进行卡方检验，α=0.05；Logistic回归分析各因素之间的相关性；RTFQ-PCR数据处理采用比较Ct值法(2-ΔΔCt法)；Plt;0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1微小小单胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的检出率

68例感染组样本扩增出目标条带32例，根管内微小小单胞菌检出率为47.1%(32/68)，62例再次感染组样本6例扩增出目标条带，根管内微小小单胞菌检出率为9.7%(6/62)，首次感染检出率明显高于再次感染组，两组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)，见表1。

表1 微小小单胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的检出率(%)

注：与再感染组比较，χ2=5.063，*Plt;0.05

2.2优势菌在慢性根尖周炎感染根管中的检出率及与微小小单胞菌的相关性分析

16S rDNA结果显示，牙髓优势菌粪肠球菌、牙髓卟啉单胞菌、牙龈卟啉单胞菌在首次感染中的检出率分别为4.4%、41.2%和16.2%，再次感染组检出率为25.8%、14.5%和4.8%。Logistic回归分析表明，首次感染和再感染组患者标本中微小小单胞菌与牙髓卟啉单胞菌检出具有相关性，与其他单胞菌无相关，见表2。

表2 优势菌与微小小单胞菌的相关性

注：ORgt;2表示两者间存在相关关系，ORlt;0.5表示两者间无相关关系。

2.3首次感染和再感染过程微小小单胞菌DNA表达量

首次感染根管中微小小单胞菌DNA的相对表达量为(0.032±0.052)，再感染根管中微小小单胞菌DNA的相对表达量为(0.019±0.024)，首次感染组和再感染组样本中微小小单胞菌DNA的相对表达量差异无统计学意义(P=0.183)。

3 讨论

微小小单胞菌是一类革兰阳性专性厌氧球菌，菌株大多呈球形，成对或链状排列，是公认的人类牙周根尖中常驻菌[7-9]。微小小单胞菌可以通过刺激巨噬细胞释放某些炎症递质引发炎症，具有炎症刺激作用，此外其还具有蛋白水解作用，与慢性牙周炎发生具有直接关系。随着目前厌氧培养及鉴定技术的发展，人们对微小小单胞菌认识大大提高。结合国内外研究进展，本研究重点对我地区慢性根尖周炎感染根管内微小小单胞菌检出率及其与优势菌粪肠球菌、牙髓卟啉单胞菌、牙龈卟啉单胞菌的相关定植情况进行了探讨。

慢性根尖周炎感染根管内微小小单胞菌检出国外已有部分报道，有文献[10]利用DNA探针法发现待测的样本中有接近半数样本含有微小单胞菌，检出率仅次于具核梭杆菌，另外，有研究证实慢性根尖周炎有病损根管中微小小单胞菌检出率高于未病损病例[11]。本研究结果表明慢性根尖周炎首次感染组中根管内微小小单胞菌检出率较高，而再次感染组中根管内微小小单胞菌检出率下降明显，差异有统计学意义，与文献报道的结果相近[12]。经过常规治疗的根管可减少微小小单胞菌的定植可能是再次感染后检出率下降的原因。因此作者建议在日常行根管治疗中需要加强感染控制，防止再感染，提高临床治疗效果。

Logistic回归分析表明首次感染和再感染组中微小小单胞菌与牙髓卟啉单胞菌均具有相关性，可能为共生关系。原因可能与微小小单胞菌具有明显的肽酶活性，可以利用氨基酸和多肽进行代谢，进而与牙髓卟啉单胞菌存在营养共生[12]。在本研究中未发现微小小单胞菌与粪肠球菌、牙龈卟啉单胞菌之间存在相关性，可能与本研究中两菌株检出率较低有关系。此外，本研究中我们发现首次感染的根管内微小小单胞菌DNA的表达量高于再感染根管，但差异无统计学意义，提示微小小单胞菌再感染根管检出率减少但DNA表达量并未减少，可能与其他细菌协同发挥致病作用。

综上述，微小小单胞菌为慢性根尖周炎患者感染根管中的常见致病菌之一，其与牙髓卟啉单胞菌存在相关性，临床根管治疗需要加强对微小小单胞菌及其他优势菌的感染控制。

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ThetinyMicromonosporaincolonizationoftherootcanalinchronicperiapicalinfection

ZHAOXi-zhen.

(DepartmentofStomatology,SanmenxiaCentralHospital,Sanmenxia472000,China)

ObjectiveTo detect the root canal micro small Aeromonas and dominant bacteria Enterococcus faecalis.Methods100 cases of chronic periapical periodontitis were collected in our hospital for treatment of 130 teeth,according to the treatment of root canal for the first time were divided into infection group (52 patients,68 teeth) and root canal infection group (48 patients,62 teeth).Using 16S rDNA PCR analysis of micro Micromonospora and pulp pathogens in patients with the detection rate of dental specimens,the correlation analysis between micro Micromonospora and pulp of dominant bacteria.ResultsChronic periapical infection group for the first time in the root canal micro small single cell bacteria detection rate was 47.1%,reinfection group root canal micro small single cell bacteria detection rate was 9.7%,there was significant difference between two groups (Plt;0.05); the first infection and re infection of tiny small cell groups in bacteria and Porphyromonas endodontalis were correlated with other non related Aeromonas(Plt;0.05).ConclusionSmall Micromonospora in chronic periapical infection in root canals were colonization,and Porphyromonas endodontalis are related to possible symbiotic relationship.

tiny Micromonospora; pulp dominant bacteria; detection rate; correlation

1007-4287(2017)11-1920-03

R782.3

A

2016-10-11)