武当山区市售重楼饮片中总皂苷含量分析研究

2017-11-16胡怀明沈婷叶方黄良永梁文斌

中国医药导报 2017年30期

胡怀明++++++沈婷++++叶方+++++黄良永+++++梁文斌

[摘要] 目的比较武当山区市售重楼饮片中总皂苷的含量，考察医院、药店等医药市场上销售的重楼饮片质量情况，为中药重楼的生产、经销、临床使用和监管提供参考。方法收集武当山区（以湖北省十堰市为主）医院、药店中重楼饮片样品，用高氯酸显色，在406 nm波长处使用紫外-可见分光光度法测定重楼饮片中总皂苷含量。结果市售重楼饮片中重楼总皂苷的含量差异明显，收集到的23个样本中总皂苷含量最低的只有1.79%，最高达11.79%。结论市售重楼饮片的质量参差不齐，会影响临床用药的安全性、有效性。需要加强对中药重楼的生产、经销监管。推动中药材规范化种植，以保证中药质量的稳定可控。

[关键词] 重楼；总皂苷；含量

[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（c）-0132-04

Research of the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area

HU Huaiming1，2 SHEN Ting3 YE Fang1，2 HUANG Liangyong1，2 LIANG Wenbin1，2

1.Department of Pharmacy， Shiyan City Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 2.Engineering Research Center for Herbal Utilization of Hubei Province， Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 3.College of Pharmacy， Hubei University of Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan 430065， China

[Abstract] Objective To compare the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area to investigate the quality of herbal pieces purchased from hospitals， pharmacies and other pharmaceutical markets. It provides a reference for production， distribution， clinical application and regulation of Paris polyphylla. Methods Herbal pieces of the Paris polyphylla were collected from hospitals and pharmacies in Wudang Mountain Area （mainly in Shiyan， Hubei Province）. The content of total saponins in Paris polyphylla was determined by an ultraviolet-visible spectrophotometer at 406 nm with perchloric acid as chromogenic reagent. Results The content of saponins in Paris polyphylla from 23 samples had obvious differences， the minimum was 1.79%， and the maximum was up to 11.79%. Conclusion The quality of Paris polyphylla is unstable which can affect the safety and efficacy of clinical application. The supervision of the production and marketing of Paris polyphylla need to be strengthened. Only by promoting the standardized planting of Chinese medicine materials， the stable quality of Paris polyphylla can be ensured.

[Key words] Paris polyphylla； Total saponins； Content

重樓为百合科重楼属植物[1]，有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊之功效。现代药理研究发现重楼具有免疫调节、止血、抗肿瘤[2-4]、心血管系统作用[5]等多种药理活性，其活性成分主要为重楼总皂苷[6]和黄酮类化合物[7-8]。我国主要分布在云南、贵州、四川、湖北等地[9-10]，武当山区分布有2种6变种[11]，《中国药典》（2015版）规定药用重楼为云南重楼[Paris polyphylla Sm. var. yunnanensis（Franch.）Hand.-Mzt.]或七叶一枝花[P. polyphylla Sm. var. chinensis（Franch.）Hara.]的干燥根茎[12]。但药农在采挖野生重楼过程中没有区分是否药典规定的品种，药材收购商也无鉴别真伪能力，所以当前我国中药材市场上存在着中药品种不纯正、掺假造假等多种现象，影响临床疗效和安全[13]，因此加强质量控制和监管是保证中药材质量的关键举措。《中国药典》[12]采用HPLC法测定重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量作为质量控制方法，而中药的特点是整体性和模糊性[14]，几种单体成分不能完全反映中药的整体质量。采用紫外-可见分光光度法测定重楼中总皂苷的含量可以作为重楼质量控制方法的有益补充[15]。endprint

1 仪器与试药

1.1 仪器

TU-1901全自动紫外可见分光光度仪（北京通用普析仪器有限责任公司）；TDL-5A高速离心机（德国菲恰爾）；FA-2004电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；AUW-120D型电子分析天平（日本岛津）；电热恒温水浴锅（北京医疗设备厂）；XT-NX1氮吹仪（Made in U.S.A.）。

1.2 试药

重楼皂苷Ⅶ对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111593-201303，含量92.5%），重楼饮片样本搜集于以湖北省十堰市为主的武当山区医院药房、社会药店等地。样本粉碎过三号筛备用。甲醇为色谱纯，无水乙醇、高氯酸等试剂为分析纯，水为自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

精密称取2.0 g重楼饮片粉末置磨口三角烧瓶中，加入90%乙醇24 mL，水浴回流提取1 h，3000 r/min离心5 min，滤渣重复提取1次，上清液合并至100 mL量瓶中，用90%乙醇定容至刻度[16]。精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液A1～A23。

2.2 对照品溶液的制备

取重楼皂苷Ⅶ适量，精密称定，加甲醇稀释成每毫升含0.1 mg的对照品溶液。

2.3 检测波长的选择

分别吸取对照品溶液和供试品溶液A1适量，置于10 mL具塞试管中，氮气吹干后加入5 mL高氯酸，密塞，60℃水浴反应15 min后，置冷水浴中冷至室温，在350～600 nm范围内进行扫描，结果样品和对照品溶液均在406 nm处有最大吸收，且较稳定，因此确定406 nm为测定波长。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，置于10 mL具塞试管中，按“2.3”项下处理显色后，在406 nm波长处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，重楼皂苷Ⅶ对照品含量（X，mg）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=3.7855 X-0.0026，R2=0.9944。表明重楼皂苷Ⅶ含量在0.00962～0.2886 mg之间时与吸光度呈良好的线性关系。

2.4.2 精密度试验精密吸取对照品溶液1 mL于具塞试管中，按“2.3”项下方法操作显色后，在406 nm波长下连续测定吸光度，结果得吸光度的RSD为0.99%（n=5），表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验精密称取16号重楼饮片粉末2 g，共计6份，按“2.1”项下方法处理后，分别精密吸取各溶液1 mL于6只具塞试管中，按“2.3”项下方法显色后，在406 nm波长下测定吸光度，计算总皂苷含量。结果得6份样品平均含量为2.58%，RSD为0.79%（n = 6），表明方法重复性良好。

2.4.4 稳定性试验取A1号供试品溶液1 mL于具塞试管中，按“2.3”项下方法显色后，在0、0.5、1.0、2.0、4.0 h时测定其吸光度，结果得RSD为1.93%（n = 5），表明样品溶液在显色后4 h内稳定性良好。

2.4.5 加样回收率试验精密称取同批次20号重楼饮片粉末约1 g，共计6份，按“2.1”项下方法提取定容至100 mL量瓶中后，精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，再加入浓度为0.2405 mg/mL对照品溶液1.0 mL，混匀，用甲醇定容至刻度。精密量取混合溶液1.0 mL置于具塞试管中，按“2.3”项下方法显色后，在406 nm波长下测定其吸光度，计算加样回收率。见表1。

2.5 样品含量测定

精密量取供试品溶液A1～A23各1 mL，分别置于具塞试管中，挥干后加入5 mL高氯酸，置60℃水浴中15 min，取出，冷水浴至室温，在406 nm波长处测定吸光度，计算样品中重楼总皂苷的含量。见表2。

3 讨论

3.1 市售重楼中药饮片质量参差不齐

从测定的23个重楼饮片样本中总皂苷含量的结果分析可以看出，武当山区市售重楼饮片中重楼总皂苷的含量差异较明显，最低的只有1.79%，最高达11.79%。虽然样本主要收集于以十堰市及其周边地区为主的医院、药店，范围较小，样本量也不足，但从收集的信息看，这些样本产于湖北、云南、四川几个重楼主产区，主要经销公司包括湖北、安徽、河南几个省，辐射面可能很广，所以这些样本具有一定的代表性。各样本之间总皂苷存在明显差异，说明药材市场上重楼饮片的质量参差不齐，肯定会影响临床用药的安全性、有效性。

3.2 保证中药饮片质量要从源头做起

由于重楼对生长环境要求较高，而且需要生长五年以上才能药用[17-19]。重楼价格逐年上涨，刚采挖的鲜品售价每公斤超过百余元，药农为逐利不再遵循采大留小的传统，进行灭绝性采挖，重楼中的有效成分含量富集不足[19-20]，药农在采挖过程中也不能区分品种，药材的质量就不能保证。通过分析比较市售重楼饮片总皂苷含量也验证了目前重楼资源现状。武当山区是南水北调中线工程上游水源地，优良的自然环境适于推广重楼等中药材种植[9-10]。应当以保护上游水资源、发展生物产业为契机，推动中药材规范化、产业化种植，以保证中药质量的稳定可控，为本地区中药资源的合理开发利用和可持续发展做出应有的贡献。

[参考文献]

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1978：86-96.

[2] 叶方，柳施一，胡培，等.武当山区重楼属植物基于ITS2的种内鉴别研究[J].中草药，2017，48（3）：550-558.endprint

[3] Zheng JY，Wang H，Chen XX，et al. Microsatellite markers for assessing genetic diversity of the medicinal plant Paris polyphylla var.chinensis（Trilliaceae） [J]. Genet Mol Res，2012，11（3）：1975-1980.

[4] Song Y，Li MF，Xu J，et al. Polymorphic microsatellite markers in the traditional Chinese medicinal plant Paris polyphylla var.yunnanensis [J]. Genet Mol Res，2015，14（3）：9939-9942.

[5] Li P，Fu JH，Wang JK，et al. Extract of Paris polyphylla Simth protects cardiomyocytes from anoxia-reoxia injury through inhibition of calcium overload [J]. Chin J Integr Med，2011，17（4）：283-289.

[6] 年四輝，刘丽敏.重楼地上部分初步开发实验研究[J].云南中医中药杂志，2007，28（4）：35-36.

[7] 钟月姣，刘莹，于新海，等.重楼活性成分及药理作用研究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2016，2：69-71.

[8] Malla B，Gauchan DP，Chhetri RB. An ethnobotanical study of medicinal plants used by ethnic people in Parbat district of western Nepal [J]. J Ethnopharmacol，2015，165：103-117.

[9] 叶方，程镇，杨光义，等.重楼植物的栽培技术研究进展[J].中南药学，2015，13（11）：1186-1189.

[10] 杨光义，胡培，叶方.重楼资源分布与可持续利用研究进展[J].中国药师，2016，19（1）：159-162.

[11] 叶方，胡培，杨光义，等.湖北武当山地区重楼资源调查[J].中药材，2015，38（8）：1616-1618.

[12] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2015：260.

[13] 陈芳萍.中药质量影响中医临床疗效[J].海峡药学，2016， 28（3）：197-198.

[14] 杨光义，叶方，郝新才.半仿生提取法在中药新药研究中的应用[J].中国药师，2010，13（8）：1188-1190.

[15] 叶方，程镇，杨光义，等.紫外-可见分光光度法测定武当山区重楼属植物总皂苷的含量[J].中国药师，2015， 18（11）：1983-1985.

[16] 卢伟，杨光义，叶方，等.正交试验设计优选重楼总皂苷提取工艺[J].中国药师，2015，18（9）：1484-1487.

[17] 叶方，黄良永，陈黎，等.武当山区人工种植重楼中9种重楼皂苷含量分析[J].中南药学，2016，14（11）：1244-1248.

[18] 杨光义，胡培，叶方，等.武当山区重楼属植物皂苷类成分含量比较[J].中南药学，2016，14（1）：77-81.

[19] 吴建平，叶方，陈黎，等.武当山区栽培重楼根茎与须根中九种重楼皂苷含量比较[J].海南医学，2016，27（22）：3613-3617.

[20] 杨金霞，张慧，叶方，等.武当山区不同采收期宽叶重楼地上部分总黄酮的累积规律[J].中国医药导报，2016， 13（24）：16-20.