猪瘟诊断技术

2017-11-15张乾义中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室

兽医导刊 2017年21期

关键词：缺点优点猪瘟

张乾义/中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室

猪瘟诊断技术

张乾义/中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室

一、猪瘟临床症状

1.最急性型猪瘟。突然死亡；突然发病，表现为全身痉挛、四肢抽搐，皮肤和粘膜发绀。

2.急性和亚急性型猪瘟。急性发病期为6～20 d，亚急性为21～30 d；发病率、死亡率高达90%；白细胞数量严重下降，不及正常猪的1/2；体温升至41℃～42℃以上；食欲下降或停止；精神极度沉郁、扎堆；病后不久，病猪全身无力、走路不稳，后躯表现明显。

3.慢性型猪瘟。多发生于老疫区或接种猪瘟疫苗但免疫水平不高的猪群；病程通常在一个月以上；常有严重的继发感染；食欲减退；体温出现周期性发热；便秘与腹泻交替发生；病猪毛色粗乱，生长停滞。皮肤呈现紫色出血斑、出疹或坏死；病猪难以完全康复，常成为僵猪。

4.持续性感染型猪瘟。不表现临床症状，无典型猪瘟的临床症状；死亡率低，病程长，超过一个月甚至长期存在；母猪繁殖障碍，表现为“带毒母猪综合征”，产木乃伊胎、死胎、畸形胎，新生仔猪发颤抖病。

持续感染型猪瘟危害最大：（1）带毒导致免疫失败。“健康”的先天性带毒仔猪均不能消除体内的病毒，临床上表现为仔猪发病、死亡，产生免疫耐受，疫苗之后不产生抗体，导致免疫失败；（2）恶性循环。带毒仔猪进入后备猪群体成为种猪，形成恶性循环，成为重要的传染来源，这是目前对我国规模猪场养猪业危害最大的感染形式；（3）散毒。带毒仔猪如果逃避病原监测而进入后备猪群体，经水平传播不断排向外界，引起易感猪感染、发病和感染，并污染环境，导致再一个猪群内病毒持续存在，难以清除。

二、病理剖检

1.最急性型猪瘟。无明显病变，仅见粘膜、肾脏有少量的出血。

2.急性和亚急性型猪瘟。（1）脾脏：脾的边缘或脾体表面可见从粟粒至黄豆大，数目不等的紫红色或紫黑色出血性坏死灶。梗死灶组织坚实、表面稍凸于周围正常组织，切面呈楔形，其检出率约为占总病例的30%～40%；（2）肾脏：病变明显，颜色淡有时呈土黄色，有针尖大至米粒大出血点，量少时出血点稀疏甚至只有少数几个，量多时密布整个肾脏表面，如麻雀蛋外观；（3）淋巴结：主要表现为淋巴结肿胀，表面呈深红色至紫黑色。切面呈红白相间的大理石状外观，在颌下、咽背、耳下、支气管、胃门、肾门、腹股沟及肠系膜等淋巴结病变最明显；（4）全身多数组织和器官：表现出血，喉头和会厌软骨上多数有小出血点。肠道淋巴滤泡常肿大。膀胱散在点状出血，胃大弯内粘膜常见明显的充血和出血，表面糜烂、溃疡。

3.慢性猪瘟。肠粘膜充血、出血；回盲瓣溃疡，呈纽扣状。

4.持续性感染型猪瘟。无症状或症状不明显；仔猪先天性感染CSFV，导致发生死胎、木乃伊胎、胎儿皮下水肿，腹腔积水以及畸形胎儿，出生后很快死亡的胎儿通常在皮肤和内脏器官呈现点状出血。

三、猪瘟实验室诊断

（一）动物接种

很少使用，几乎不用，包括兔体交互试验和本动物试验。

（二）猪瘟抗原检测

包括抗原ELISA、免疫荧光/过氧化物酶实验。

1.ELISA。检测物：血液、组织研磨液。优点：操作简便，检测时间短。缺点：灵敏度低，田间感染很难检测。

2.免疫荧光/过氧化物酶实验。检测物：组织切片、抹片。优点：特异性高、检测时间短。缺点：对检验人员要求高，敏感度低。

（三）病毒分离

病毒分离是实验室诊断的经典方法。

1.检测组织类型。（1）血液：脱纤血、抗凝血；（2）扁桃体：可活体采样、猪瘟病毒嗜性组织；（3）淋巴结：颌下淋巴结和肠系膜淋巴结，不可活体采样；（4）脾脏：健康脾脏（应为饱满的红棕色）；苍白、柔软、边缘梗死-病毒感染。适宜在梗死灶之间进行采样；（5）肾脏：苍白的红棕色-健康肾脏；表面有针状出血点-病毒感染，采样时采集皮质和髓质交界处；（6）回肠：回肠底部溃烂是急性猪瘟的典型症状，但只见于回肠内壁；溃烂周围组织是病毒富集区，适宜进行采样。

2.操作流程。组织处理—接种—结果判定—鉴定。

3.优缺点。优点：特异性好，可用于病毒的进一步鉴定和毒种保护。缺点：灵敏度低，检测周期长，易出现假阴性。

（四）病毒核酸检测

病毒核酸检测是实验室诊断最常用的方法。

荧光RT-PCR：用于猪瘟病毒野毒、疫苗毒等所有毒株的诊断和监测，适用于猪活体及其脏器、血液、排泄物和细胞培养物中CSFV核酸的检测。注意事项：（1）设置NTC对照，包括样本NTC对照与体系NTC对照；（2）实验分区（试剂配置区、样本处理区、核酸扩增区）；（3）避免与引物在同靶区域的开盖PCR方法同时使用造成污染；（4）检测结束后不要开盖，密封处理；（5）大规模检测时，建议使用UNG防污染体系。