杨振国，谢道燕，倪 婧，苏振国，罗雁婕

(云南省农业科学院 蚕桑蜜蜂研究所， 云南 蒙自 661101)

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2017，29(10): 1692-1698

杨振国，谢道燕，倪婧， 等. 联苯肼酯药后对朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵抑制作用及所产螨卵的影响[J]. 浙江农业学报， 2017， 29(10): 1692-1698.

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2017-04-21

国家自然科学基金项目(31560520)；云南省科技计划重点新产品项目(2015BB009)

杨振国(1986—)，男，苗族，云南砚山人，硕士，助理研究员，研究方向为桑树病虫害防控研究。E-mail: zhenguoyang@qq.com

*通信作者，罗雁婕，E-mail: yanjieluo@126.com

联苯肼酯药后对朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵抑制作用及所产螨卵的影响

杨振国，谢道燕，倪 婧，苏振国，罗雁婕*

(云南省农业科学院 蚕桑蜜蜂研究所， 云南 蒙自 661101)

为明确联苯肼酯施药后对叶螨产卵及所产卵的影响，在室内通过叶碟法比较了不同浓度联苯肼酯药液对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨的杀螨活性、药后产卵变化及所产螨卵的孵化情况。结果表明：1.25～100.00 mg·L-1联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨的雌成螨均具有显著杀螨活性，药后24 h的LC50分别为7.52和12.42 mg·L-1，药后2种叶螨的成螨产卵受到显著抑制，其产卵抑制率分别为27%～81%和10%～80%，产卵抑制中浓度分别为4.16和6.86 mg·L-1。2种叶螨药后所产螨卵的孵化率随联苯肼酯浓度的增大而显著降低，对药后所产卵的LC50分别为24.26和15.28 mg·L-1。因此，联苯肼酯在杀死成螨的同时也具有明显的产卵抑制作用，且药后所产螨卵的孵化也受到明显影响。

联苯肼酯；杀螨活性；朱砂叶螨；二斑叶螨；产卵抑制

植食性叶螨多为孤雌生殖，具有繁殖力强、代数多、适应性极强、易产生抗药性等特点，其中以二斑叶螨(Tetranychusurticae)和朱砂叶螨(Tetranychuscinnabarinus)危害最为严重[1-2]。化学药剂防控始终是叶螨的有效防控措施，杀螨剂也占据较大的农药市场，但长期使用化学杀螨剂，致使叶螨的抗药性不断增强，极大地增加了防控的难度[3]。开展杀螨剂的活性研究，对于叶螨的有效防控及抗药性治理均具有重要作用和意义。

联苯肼酯(bifenazate)，化学名称为3-(4-甲氧基联苯基-3-基)肼基甲酸异丙酯，是由美国有利来路化学公司(Uniroyal Chemical)于1990年研制的新型联苯肼类杀螨剂，并于1999年由康普顿集团公司(Crompton Corporation)商品化后用于防治观赏植物上的叶螨[4]。美国科聚亚公司于2009年在中国获得了联苯肼酯的原药登记，主要用于防治苹果树红蜘蛛。该杀螨剂主要作用于电子传递链中细胞色素b复合物III的Qo位点[4]。该药对叶螨各发育阶段均有效，目前国内的研究表明，其对朱砂叶螨和二斑叶螨的成螨、若螨、螨卵具有毒杀作用[5-6]，也有试验表明其能有效防治苹果全爪螨(Panonychusulmi)、山楂叶螨(Tetranychusvienensis)、柑橘全爪螨(Panonychuscitri)等植食性叶螨[7-8]，且对捕食螨较为安全[9]。杀虫剂药后对害虫产卵的影响及药后所产卵的孵化情况，直接影响害虫的再猖獗与否，如吡虫啉药后能够刺激二斑叶螨的产卵[10]。联苯肼酯作为一种高效且重要的杀螨剂，其药后对叶螨产卵的影响不仅关系到叶螨的有效防控，还与叶螨的再猖獗直接相关。为此，本研究比较了不同浓度联苯肼酯药后朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵差异，以及药后所产螨卵的孵化率，以期为联苯肼酯的科学合理应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试叶螨

供试叶螨为朱砂叶螨和二斑叶螨，均采自云南省蒙自市桑园，经分离纯化后在室内用蛭石栽培的菜豆苗饲养多代筛选相对敏感品系，其饲养条件为温度(26±1) ℃，湿度 60%～80%，光周期14 h∶10 h(L/D)。试验时，根据大小及颜色选取3～5日龄大小一致、颜色鲜艳、活泼的朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨，移至3 cm×3 cm的叶蝶上，放置2 h待其活动稳定后在双目解剖镜下剔除死亡叶螨及所产螨卵，然后喷施药剂。

1.2 供试药剂

43%联苯肼酯悬浮剂，麦德梅农业解决方案有限公司(美国)产品。

1.3 试验方法

施药方法为叶碟喷雾法，喷雾器具为Burkard标准型Potter喷雾塔，喷雾量为1.0 mL药液，喷雾压强为20 kPa，沉降时间为10 s。将供试药剂用洁净的自来水稀释成所需浓度梯度，以自来水为对照。将带有叶螨的叶碟置于喷雾塔正中央喷雾，喷药后，把带有叶螨的叶碟置于同等条件下饲养24 h后调查成螨的死、活螨数及产卵量，用毛笔轻触螨体，以其螯肢不动者为死亡。剔除叶蝶上所有的叶螨，放置同等饲养条件下7 d，然后调查所产卵的孵化情况。每个药剂及对照处理3个叶蝶，每个叶蝶40～50头雌成螨，重复3次。试验后，统计死亡率、平均每雌产卵量、产卵抑制率、产卵抑制指数、孵化率等指标。计算方法如下[11]：

校正死亡率(%)=[(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)]×100；

平均每雌产卵量=24 h的产卵总数/处理总数；

孵化率(%)=孵化卵数/总卵数×100；

产卵抑制率(%)=[(对照产卵数-处理产卵数)/对照产卵数]×100；

产卵抑制指数=(对照产卵数-处理产卵数)/(对照产卵数+处理产卵数)。

1.4 数据统计与分析

试验数据的统计与分析主要用Microsoft Excel 2010、SPSS17.0和DPS7.05软件，SPSS 17.0分析各处理间的差异性(Duncan新复极差检验)和曲线拟合；采用DPS7.05的“生物测定-数量型数据机值分析”分析毒力回归方程，其中，卵的毒力回归分析统计时，将未孵化率作为死亡率进行计算。

2 结果与分析

2.1 联苯肼酯的杀螨活性

随联苯肼酯浓度的降低，其杀螨活性显著下降。100.00和50.00 mg·L-1联苯肼酯的杀螨活性不存在显著性差异，显著高于其他浓度的校正死亡率(25.00 mg·L-1联苯肼酯处理朱砂叶螨除外)；相同浓度联苯肼酯处理对2种叶螨的杀螨活性无显著差异(表1)。处理后24 h，联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨的LC50分别为7.52和12.42 mg·L-1，表明朱砂叶螨成螨对联苯肼酯的敏感性大于二斑叶螨成螨(表2)。

2.2 联苯肼酯药后对叶螨产卵的影响

与对照组相比，联苯肼酯处理朱砂叶螨和二斑叶螨24 h后，平均每雌产卵量受到不同程度的影响。5.00～100.00 mg·L-1联苯肼酯处理，朱砂叶螨平均每雌产卵量不存在显著差异；对照组朱砂叶螨24 h平均每雌产卵量为5.34粒，而联苯肼酯浓度超过25.00 mg·L-1时，朱砂叶螨24 h平均每雌产卵量为1粒左右，各药剂处理均显著低于对照(P=0.001)；对照组中二斑叶螨处理24 h平均每雌产卵量为4.36粒；除1.25 mg·L-1处理外，联苯肼酯各浓度处理下二斑叶螨的平均每雌产卵量均显著低于对照(P<0.000 1)，10.00～100.00 mg·L-1联苯肼酯处理间平均每雌产卵量不存在显著差异(表3)。

表1不同浓度的联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨的杀螨活性

Table1Acaricidal activities of different concentration of bifenazate againstT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

联苯肼酯浓度Bifenazateconcentration/(mg·L-1)校正死亡率Correctedmortality/%朱砂叶螨T．cinnabarinus二斑叶螨T．urticae100009714±286a9504±304a50008976±385a8817±246a25008432±415ab7009±134b12506653±174bc4563±692c10005289±224cd2889±236d5003664±278cd2142±791d2502379±250cd2070±737d125927±013d438±110e0094±0e0f

同列数据后无相同小写字母表示差异显著(P<0.05，Duncan新复极差测验)。表3、5、7同。

Data marked without the same lowercase letter in each column indicated significant differences (P<0.05， Duncan multiple mean test).The same as table 3, 5, 7.

表2联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨的毒力

Table2Toxicities of bifenazate againstT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

叶螨Mite毒力回归方程ToxicityregressionequationLC50及95%置信区间LC50and95%CI/(mg·L-1)FPr朱砂叶螨T．cinnabarinusy=354+167x752(680～832)784820000109962∗∗二斑叶螨T．urticaey=313+117x1242(989～1558)144120000109798∗∗

**表示在0.01水平上显著相关(P<0.01)。

**represent the correlation was significant atP<0.01.

不同浓度联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨的校正死亡率随浓度的增加而增加，24 h每雌产卵量则相反。联苯肼酯作用于2种叶螨后，其24 h平均每雌产卵量与校正死亡率的变化趋势呈“×”交叉状(图1)。Pearson相关性分析表明，2种叶螨的死亡率与24 h平均每雌产卵量呈极显著(P<0.01)负相关关系，朱砂叶螨和二斑叶螨的Pearson相关系数分别为-0.921 1(P=0.000 2)和-0.871 2(P=0.001 1)。表明联苯肼酯作用于2种叶螨后，其每雌产卵量随其死亡率的增大而显著降低，也是随浓度的增大而显著降低(表4)。

2.3 联苯肼酯对叶螨的产卵抑制作用

表3不同浓度联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨产卵影响

Table3Effect of different concentration of bifenazate on oviposition ofT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

浓度Concentration/(mg·L-1)平均每雌产卵量Meaneggsperfemale朱砂叶螨T．cinnabarinus二斑叶螨T．urticae10000100±002d099±028d5000113±004cd083±005d2500136±016cd109±015d1250206±057cd113±043d1000202±064cd176±027cd500219±041cd209±012c250286±035bc299±016b125386±070b391±069a0534±049a436±073a

图1 不同浓度联苯肼酯处理后朱砂叶螨(A)和二斑叶螨(B)的死亡率与产卵量关系Fig.1 Relationship between mortality and fecundity of the different concentration of bifenazate against T. cinnabarinus(A) and T. urticae(B) female adults

表4联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨死亡率与产卵量影响的Pearson相关性分析

Table4Pearson correlation analysis of mortality and fecundity of bifenazate againstT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

叶螨Mite死亡率Mortality/%平均每雌产卵量Meaneggsperfemale协方差CovariancerP朱砂叶螨T．cinnabarinus5136±3550242±141-461520-09211∗∗00002二斑叶螨T．urticae4159±3531213±133-408258-08712∗∗00011

基于不同浓度的联苯肼酯作用于2种叶螨后其产卵量显著下降，比较了不同浓度下该药对2种叶螨的产卵抑制作用。结果(表5)表明：1.25～100.00 mg·L-1联苯肼酯药液对朱砂叶螨的产卵抑制率为27.74%～81.34%，产卵抑制指数为0.17～0.69；联苯肼酯浓度超过10.00 mg·L-1时，对朱砂叶螨的产卵抑制率大于60%。联苯肼酯浓度为1.25～100.00 mg·L-1时，对二斑叶螨的产卵抑制率为10.40%～80.86%，产卵抑制指数为0.06～0.63，联苯肼酯浓度超过10.00 mg·L-1时，对二斑叶螨的产卵抑制率大于60%。低浓度的联苯肼酯对朱砂叶螨的产卵抑制作用略高于对二斑叶螨的产卵抑制作用，但差异不显著。

表5不同浓度联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨的产卵抑制作用

Table5Oviposition inhibitory activity of different concentration of bifenazate againstT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

浓度Concentration/(mg·L-1)朱砂叶螨T．cinnabarinus产卵抑制率Ovipositioninhibitoryrate/%产卵抑制指数Ovipositioninhibitoryindex二斑叶螨T．urticae产卵抑制率Ovipositioninhibitoryrate/%产卵抑制指数Ovipositioninhibitoryindex100008134±043a069±001a7736±456ab063±006a50007891±069a065±001a8086±087a068±001a25007454±298ab060±004a7503±241ab060±003a12506143±568ab045±011ab7403±693ab059±009a10006211±607ab046±013ab5961±437bc043±004b5005901±772ab042±008ab5214±201c035±002b2504650±652bc031±006c3150±255d019±002c1252774±717c017±009d1040±710e006±006c

采用SPSS拟合产卵抑制率与联苯肼酯浓度间的关系，拟合曲线如图2所示。联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵抑制率与其浓度间的数学模型方程均通过了拟合度检验，其相关性系数r分别为0.960 7和0.919 3，F检验值分别为71.892 8和32.742 5，显著性水平P分别为0.000 1和0.001 2(表6)，即联苯肼酯浓度与朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵抑制率在0.01水平上显著相关。通过数学模型方程可计算出联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨的产卵抑制中浓度分别为4.16和6.86 mg·L-1。

2.4 联苯肼酯药后对叶螨所产卵的致死作用

不同浓度联苯肼酯作用于朱砂叶螨和二斑叶螨后，其所产螨卵的孵化率随联苯肼酯浓度的增加而显著下降，且二斑叶螨的孵化率总体低于朱砂叶螨。对照组朱砂叶螨和二斑叶螨所产螨卵的孵化率分别为99.77%和99.31%，1.25和2.50 mg·L-1联苯肼酯处理的朱砂叶螨所产螨卵的孵化率分别为99.56%和97.89%，与对照组差异不显著，其他各处理的孵化率均显著低于对照组(F=701.268 6，P<0.000 1)；1.25、2.50和5.00 mg·L-1联苯肼酯处理的二斑叶螨所产螨卵的孵化率分别为98.00%、93.01%和92.85%，与对照差异不显著，其他各处理的孵化率显著低于对照组(F=44.021 6，P<0.000 1)；100.00 mg·L-1联苯肼酯处理下朱砂叶螨和二斑叶螨所产卵的孵化率分别低至4.67%和2.81%(表7)。通过各组卵的孵化率统计联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨卵的毒力，其毒力回归方程在0.01水平显著相关，具有较好的拟合度，其对朱砂叶螨和二斑叶螨卵的LC50分别为24.26和15.28 mg·L-1(表8)。

图2 联苯肼酯浓度与叶螨产卵抑制率间的关系Fig.2 Relationship between bifenazate concentration and oviposition inhibitory rate of T. cinnabarinus and T. urticae female adults

表6联苯肼酯浓度与朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨产卵抑制率间的数学模型方程及参数

Table6Mathematical model equation of bifenazate concentration and oviposition inhibitory rate ofT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults

叶螨Mite方程Equation系数SESEofcoefficient常数SESEofconstantEC50/(mg·L-1)FPr朱砂叶螨T．cinnabarinusy=1158lnx+33501373804167189280000109607∗∗二斑叶螨T．urticaey=1562lnx+19912737606863274250001209193∗∗

3 讨论

表7联苯肼酯处理后朱砂叶螨和二斑叶螨雌成螨所产卵的孵化率

Table7Hatchability of eggs fromT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults treated by bifenazate

浓度Concentration/(mg·L-1)孵化率Hatchability/%朱砂叶螨T．cinnabarinus二斑叶螨T．urticae10000467±097f281±281c50001830±030e1701±064c25004793±088d2181±311c12508753±160c5881±038b10009099±067bc6882±138b5009267±344b9285±218a2509789±105a9301±215a1259956±044a9800±200a09977±023a9931±001a

杀螨剂对叶螨繁殖力的影响一直备受关注，谷清义等[12-13]研究表明，螺螨酯、阿维菌素和哒螨灵的亚致死剂量能够显著降低土耳其斯坦叶螨T.turkestan的每雌产卵量及卵的孵化率，并且哒螨灵和唑螨酯的残留毒力也可以降低二斑叶螨的产卵量[14]；毒死蜱、螺螨酯和炔螨特的亚致死剂量能够显著降低朱砂叶螨的每雌产卵量及卵的孵化率[15-17]；植物源杀螨活性物质姜黄素类化合物(姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素)和东莨菪内酯也具有抑制朱砂叶螨产卵的活性[11，18]。关于联苯肼酯的产卵抑制作用方面，范潇[19]报道了联苯肼酯处理二斑叶螨雌成螨和幼螨后，其成螨的平均每雌产卵量显著降低，孵化率及孵化后叶螨的存活率也显著低于对照，且巴氏新小绥螨(Neoseiulusbarkeri)取食受联苯肼酯处理的二斑叶螨后其产卵也受到显著的抑制，本研究结果与其一致。本研究结果表明，不同浓度的联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨均具有显著的产卵抑制作用，每雌产卵量与处理浓度呈显著负相关关系，产卵抑制率则与浓度呈显著正相关关系，2种叶螨药后所产螨卵的孵化率也显著降低，特别是100.00 mg·L-1联苯肼酯处理下，朱砂叶螨和二斑叶螨的校正死亡率分别为97.14%和95.04%；产卵抑制率分别为81.34%和77.36%，所产的螨卵的孵化率分别低至4.67%和2.81%。而43%联苯肼酯SC的田间推荐剂量为稀释2 000～3 000倍(有效成分含量>100.00 mg·L-1)，即在推荐剂量下，联苯肼酯不仅可以有效杀死朱砂叶螨和二斑叶螨的成螨，而且可以有效抑制雌成螨产卵，同时，还可以有效抑制施药后所产卵的孵化。

表8联苯肼酯对朱砂叶螨和二斑叶螨卵的毒力

Table8Toxicities of bifenazate against eggs ofT.cinnabarinusandT.urticae

叶螨Mite毒力回归方程ToxicityregressionequationLC50及95%置信区间LC50and95%CI/(mg·L-1)FPr朱砂叶螨T．cinnabarinusy=176+234x2426(1886～3120)153110000109810∗∗二斑叶螨T．urticaey=241+219x1528(1254～1862)198820000109852∗∗

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EffectsofbifenazateoneggsandovipositioninhibitoryactivitiesofTetranychuscinnabarinusandTetranychusurticae

YANG Zhenguo， XIE Daoyan， NI Jing， SU Zhenguo， LUO Yanjie*

(InstituteofSericulture&Apiculture，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Mengzi661101，China)

In order to ascertain the effect of bifenazate on spider mites oviposition and mite eggs. The acaricidal activities， oviposition changes and egg hatch under different concentration of bifenazate againstTetranychuscinnabarinusandT.urticaewere compared by leaf disc method in indoor condition. The results indicated that 1.25-100.00 mg·L-1bifenazate showed significantly acaricidal activities againstT.cinnabarinusandT.urticaefemale adults with LC50of 7.52 and 12.42 mg·L-1， respectively， and their oviposition were significantly inhibited with the oviposition inhibitory rate between 27% to 81% and 10% to 80%， and the median oviposition inhibitory concentration were 4.16 and 6.86 mg·L-1， respectively. Moreover， hatchability significantly decreased with increasing bifenazate concentration， and the LC50were 24.26 and 15.28 mg·L-1， respectively. Therefore， bifenazate not only killed adult mites， but also had a significant effect on oviposition inhibitory， and the hatching of sprayed mite eggs was also significantly affected.

bifenazate; acaricidal activity;Tetranychuscinnabarinus;Tetranychusurticae; oviposition inhibitory

S482.3

A

1004-1524(2017)10-1692-07

（责任编辑侯春晓)