皮文辉

绵羊成纤维细胞中TALE-TFs激活β酪蛋白基因启动子研究

皮文辉

（绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室，新疆 石河子 832000）

针对绵羊 β-酪蛋白基因启动子序列设计4个人工转录因子TALE-TFs（Transcription activator-like Biffectortranscription factors）。电转染TALE-TFs进入绵羊成纤维细胞中，通过实时荧光定量和Western blotting检测β-酪蛋白基因表达，筛选获得激活效果较好的TALE-TF1。将TALE-TF1和β-酪蛋白基因启动子、Red报告基因质粒电转染进入绵羊成纤维细胞，通过荧光显微镜直接观察报告基因Red表达。研究表明，利用TALE人工转录因子，在绵羊成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框，为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了一种检测途径。

TALE-TFs；绵羊成纤维细胞；β-酪蛋白基因启动子；表达调控

0 引言

1987年，Gordon等采用原核显微注射转基因技术获得乳腺生物反应器小鼠模型[1]。随着转基因技术体系的发展，在哺乳动物基因组的高表达乳蛋白基因座，定位整合外源基因，利用乳蛋白基因固有的转录翻译机制，调控外源整合基因表达，可能成为构建乳腺生物反应器模型的一种途径[2-4]。

哺乳动物β-酪蛋白基因在乳腺中高表达[5，6]，皮肤[7]和有毒 T淋巴细胞（cytotoxic Tlymphocytes）[8]中也有所表达。敲除β-酪蛋白基因小鼠能够正常生长、繁殖和哺育后代[9]。乳腺中外源基因直接代替内源基因，可提高外源基因表达竞争能力[10]。因此，β-酪蛋白基因位点是制备乳腺生物反应器的合适靶点。

为证实β-酪蛋白基因启动子驱动的表达框是有效的，Kolb等采用乳腺上皮细胞进行了研究[2]。国内乳腺生物反应器研究方面，也采用乳腺上皮细胞验证表达框的有效性[11，12]。……