熊 炜，王 艳，魏晓锋，李春阳，张 强，黄忠荣，胡建华，李 健

（1.上海出入境检验检疫局，上海 200135；2.上海实验动物研究中心，上海 201203）

可视化猪肺炎支原体LAMP检测方法的建立

熊 炜1，王 艳1，魏晓锋2，李春阳1，张 强1，黄忠荣1，胡建华2，李 健1

（1.上海出入境检验检疫局，上海 200135；2.上海实验动物研究中心，上海 201203）

由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）引起的慢性肺炎是最难净化的疫病之一，它流行广、感染率高，对养猪业危害巨大。为了加强口岸现场查验动物源性产品中猪肺炎支原体的力度，本研究建立了猪肺炎支原体环介导等温核酸扩增技术（Loop-mediated isothermal ampli fi cation，LAMP）检测方法。本研究通过在LAMP反应产物中加入显色液，提高了检测结果肉眼判定的准确性，实现了结果判定可视化的目标，有助于出入境口岸货物查验现场及猪场中猪肺炎支原体的检测。

猪肺炎支原体；LAMP；可视化检测

Abstract:Mycoplasma hyopneumoniae causes chronic pneumonia among pigs, which is one of hard erased diseases with characters of wide spread and high infection. In order to survey and detect Mycoplasma hyopneumoniae carried by animal original products at entryexit port, a Loop-mediated isothermal ampli fi cation (LAMP) method was established and proved to be speci fi c with high sensitivity and stability. By adding SybrGreen into LAMP product liquid, detection results could be read easily by eyes, which is more convenient to be used by ports and basic laboratories.

Key words:Mycoplasma hyopneumoniae；loop-mediated isothermal ampli fi cation (LAMP)；visible detection

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）引发的一种慢性肺炎，又称猪地方流行性肺炎，长期以来，本病一直被认为对养猪业造成重大经济损失、且最常发生、流行最广、最难净化的重要疫病之一[1,2]。猪肺炎支原体对生长条件的需求极为苛刻，体外分离培养相当困难，它在传统的基本肉汤培养基中生长缓慢，需经3～30 d，肉汤培养基才能产生轻微的混浊，并产酸使颜色发生变化[3,4]。因此，传统的生化和血清学检测方法应用于进出境口岸猪肺炎支原体快速检测具有明显的局限性。此外，由于猪肺炎支原体易与其他猪病病原体相混淆，自然发生的病例均为混合感染，其可能混杂有细菌、病毒和寄生虫，因此其对检测方法的特异性、敏感性要求较高[5]。……