姜明哲，李国忠

(天津市第五中心医院，天津300450)

沉默细胞周期检测点激酶l基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

姜明哲，李国忠*

(天津市第五中心医院，天津300450)

目的探讨沉默细胞周期检测点激酶l(Chk1)基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人膀胱癌T24细胞，根据转染物的不同，将细胞分为siRNA-Chk1组、siRNA-对照序列组和空白对照组，利用实时荧光定量PCR检测各组细胞中Chk1基因表达，MTT法检测各组细胞增殖能力，利用流式细胞术检测各组细胞凋亡，利用流式细胞术检测各组细胞周期，利用Western blot法检测各组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白表达。结果与空白对照组和siRNA-对照序列组比较，siRNA-Chk1组细胞中Chk1 mRNA相对表达量降低(F=43.813，P=0.000)；与空白对照组和siRNA-对照序列组比较，siRNA-Chk1组细胞24 h、48 h、72 h和96 h时吸光度A值均降低(P<0.05)；与空白对照组和siRNA-对照序列组比较，siRNA-Chk1组细胞凋亡率显著增加(F=90.736，P=0.000)；流式细胞术检测结果显示，siRNA-Chk1组G0/G1期和S期高于siRNA-对照序列组和空白对照组，而G2/M期低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05)；与空白对照组和siRNA-对照序列组比较，siRNA-Chk1组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。结论特异性沉默Chk1基因可抑制人膀胱癌T24细胞增殖，加速细胞凋亡，其机制可能与抑制Chk1/Cdc25C/CyclinB1通路而减少细胞G2/M期阻滞有关。

膀胱癌；细胞周期检测点激酶l；细胞增殖；细胞凋亡

细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1，Chk1)作为高度保守的一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在维持正常的细胞周期及基因组稳定、调控细胞凋亡中具有重要作用[1]，有研究指出[2]，Chk1在多种恶性肿瘤中表达上调，与肿瘤发生及进展过程密切相关。本研究拟利用小干扰RNA(siRNA)技术特异性沉默人膀胱癌T24细胞中Chk1基因，从分子细胞学角度探讨其对细胞增殖和凋亡的影响，以期为膀胱癌机制研究提供基础资料。

1 资料与方法

1.1主要试剂和设备

人膀胱癌T24细胞购自中科院上海生物细胞研究所，RPMI-1640培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司，0.25%胰蛋白酶、磷酸盐缓冲液(PBS)购自武汉博士德生物公司，Trizol总RNA提取试剂盒、Lipfectamine 2000脂质……