郑晓燕，赵达，户长春，王彩宏，王虹，范长友，代亚楠，赵喜文，孙东波

牛结合珠蛋白α链单克隆抗体制备及辣根过氧化物酶标记

郑晓燕，赵达，户长春，王彩宏，王虹，范长友，代亚楠，赵喜文，孙东波

（黑龙江八一农垦大学，大庆 163319）

为了制备牛结合珠蛋白主要抗原区重组蛋白（pirBoHp）单克隆抗体及对其进行辣根过氧化物标记。试验利用纯化的pirBoHp作为免疫原，免疫雌性BALB/c小鼠，然后利用淋巴细胞杂交瘤技术，制备BoHp单克隆抗体。通过Western blot试验分析制备的BoHp单克隆抗体的免疫反应性；利用抗体亚型鉴定试剂盒，分析鉴定BoHp单克隆抗体的亚型和轻链型。利用改良过碘酸钠标记法，对制备的BoHp单克隆抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）标记。结果显示，试验成功制备了4株BoHp单克隆抗体，分别命名为1B3、6D6、6D3和6B7。Western blot结果显示，制备的4株BoHp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7能识别牛血浆中天然BoHp的α链。进一步抗体亚型鉴定结果表明，1B3、6D6、6D3和6B7抗体亚型均为IgG1，轻链型为kappa链。利用改良过碘酸钠标记法，对纯化的BoHp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7成功进行了HRP标记。BoHp α链单克隆抗体的制备及其HRP标记为BoHp特异性诊断方法的建立奠定了基础。

牛结合珠蛋白；单克隆抗体；辣根过氧化物酶

奶牛炎性疾病已经严重影响了奶牛的生产性能，造成了巨大经济损失，其中影响较严重的炎性疾病包括奶牛乳房炎、炎性蹄病、子宫内膜炎。尽管已有奶牛炎性疾病相关诊断方法的报道，但是目前仍然未见针对奶牛炎性疾病通用的高通量及应用便利的快速诊断方法[1]。当动物机体受到外伤、炎症或感染早期时，免疫系统首先做出的免疫应答表现在机体局部的炎症反应上，当损伤超出局部防御能力时，机体便会引发更加广泛的全身反应，引起这一非特异性免疫防御反应的过程称为急相反应。……