王利娜,贾先波，陈仕毅，王 杰，赖松家

(四川农业大学动物遗传育种研究所，四川 成都 611130)

靶向PIK3CA和AKT3基因RNA干扰对家兔SCs增殖的影响

王利娜,贾先波，陈仕毅，王 杰，赖松家*

(四川农业大学动物遗传育种研究所，四川 成都 611130)

PI3K与AKT组成的PI3K-AKT信号通路在细胞的增殖以及凋亡具有重要意义，本试验旨在研究该信号通路在家兔SCs增殖过程中发挥的作用。采用siRNA介导的PIK3CA和AKT3基因进行基因的沉默表达。结果发现对处于对数生长期的细胞转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后48 h，分别对靶基因和上下游基因PTEN和FoxO1进行qRT-PCR反应，并采用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测其在转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后对细胞增殖能力的影响。结果表明：在转染si-PIK3CA-03后，PIK3CA和AKT3基因的相对表达量均显著下调，PTEN和FoxO1基因的表达量均显著上调；当转染了si-AKT3-01后，PTEN和FoxO1基因表达量均显著上调。表明PTEN、FoxO1基因与PIK3CA、AKT3基因的相对表达量呈负相关。转染实验组OD值显著低于空白对照组(P<0.05)，说明通过转染实验下调PIK3CA和AKT3基因表达后，细胞增殖能力均有显著的下降。由此说明，分别抑制表达PIK3CA、AKT3基因后，靶基因的表达量显著下降，家兔SCs的增殖能力也显著下降，说明PIK3CA、AKT3基因能够正向调控肌细胞的增殖。

PIK3CA基因；AKT3基因；siRNA；SCs

作为原癌基因，3-磷酸肌醇激酶(phosphoinositide3-kinase， PI3K)家族成员参与多种信号通路[1]，在细胞的生长、分化和细胞凋亡途径中起重要作用[2]，从而影响细胞的数量和体积大小。然而目前有关探究该通路相关基因对骨骼肌生长发育作用的研究仍罕有报道。PI3K激活后在质膜上产生第二信使PIP3，PIP3与细胞内信号蛋白AKT的PH结构域结合，磷酸化AKT蛋白的308位苏氨酸，活化AKT蛋白。活化后的AKT通过磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白[3]，如Bad、Caspase-9、NF-κB、GSK-3、FKHR、p21Cip1，和p27Kip1等，进而起到调节细胞的增殖、分化、凋亡以及迁移等作用。PI3K-AKT信号通路对癌症细胞以及干细胞的存活和增殖具有显著的影响，例如采用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后，会显著抑制人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖[4]。……