马 渊， 李纪夫， 王玉杰△

(新疆医科大学 1第一附属医院泌尿外科， 2第五附属医院泌尿外科， 新疆 乌鲁木齐 830011)

AR-V7在前列腺癌细胞耐药中的作用

马 渊1， 李纪夫2， 王玉杰1△

(新疆医科大学1第一附属医院泌尿外科，2第五附属医院泌尿外科， 新疆 乌鲁木齐 830011)

目的探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌细胞耐药中的作用及分子机制。方法运用Lipofectamine 2000转染法将AR-V7 siRNA(siAR-V7)转染至4株前列腺癌细胞中，命名为PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞，以转染无关序列(NC siRNA)为阴性对照。运用real-time PCR和Western blot实验分别检测转染前后细胞中AR-V7的mRNA和蛋白表达水平；运用MTT法和Transwell法分别检测细胞活力和细胞迁移率；运用萤光素酶报告基因实验和Western blot实验分别检测AR的启动子活性及下游靶基因前列腺特异性抗原(PSA)和FK506结合蛋白5(FKBP5)的蛋白表达。构建耐比卡鲁胺的前列腺癌细胞系LNCaP-DR，运用免疫荧光观察LNCaP、LNCaP-siAR-V7和LNCaP-DR细胞中AR和AR-V7的亚细胞定位；运用蛋白质免疫共沉淀实验检测AR-V7与热休克蛋白90(HSP90)的相互作用。结果4株前列腺癌细胞中的AR-V7 mRNA水平显著高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.05)；PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞中AR-V7蛋白水平、细胞活性及细胞迁移率显著低于NC siRNA转染的细胞(P<0.05)。随着比卡鲁胺剂量的增加，所有细胞活力逐渐降低，而下调AR-V7表达显著增强前列腺癌细胞对比卡鲁胺的敏感性(P<0.05)。Western blot结果显示下调AR-V7表达显著抑制AR启动子活性，其下游PSA和FKBP5蛋白水平明显降低(P<0.05)。免疫荧光结果发现AR和AR-V7主要存在于前列腺癌细胞核内，AR少量存在于细胞质中；下调AR-V7表达则抑制AR的核转运；AR存在于耐药细胞核中，AR-V7在耐药细胞中高表达。免疫共沉淀结果显示内源性AR-V7与HSP90相互作用。结论AR-V7在前列腺癌细胞中高表达，下调AR-V7的表达显著抑制前列腺癌细胞活力和迁移；前列腺癌细胞耐药与AR-V7高表达相关，其机制可能通过AR-V7与HSP90相互作用介导AR-V7的核转运，激活AR信号通路调控下游靶基因的转录活性最终导致细胞耐药。

雄激素受体剪接变异体7； 前列腺癌； 耐药性； 免疫共沉淀

前列腺癌是男性泌尿系统常见恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率位居男性恶性肿瘤的第2位和第5位，每年有24万新发病例[1-2]。资料显示我国前列腺癌的发病率和死亡率呈逐年上升且年轻化趋势[3-5]。目前前列腺癌的治疗手段包括手术治疗早期前列腺癌、单纯去势治疗、去势和抗雄激素联合治疗以及内分泌治疗或雄激素剥夺疗法(androgen deprivation therapy，ADT)治疗中晚期前列腺癌和转移性前列腺癌。……