王腊梅， 钟 华， 唐 娜， 庞丽娟， 张春军， 何 芳△

(石河子大学医学院 1新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室， 2病理生理教研室， 3病理教研室， 新疆 石河子 832002)

钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用*

王腊梅1, 2， 钟 华1, 2， 唐 娜1, 2， 庞丽娟1, 3， 张春军1, 2， 何 芳1, 2△

(石河子大学医学院1新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室，2病理生理教研室，3病理教研室， 新疆 石河子 832002)

目的研究Ca2+感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaSR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法将CaSR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+CaSR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs；利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位；免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用；取2～3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(shSTIM1+shOrai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组)，将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激，采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca2+浓度的变化，NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆，与control组相比，加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后，STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少，且二者的相互作用均减弱；在4种不同处理因素作用下，shSTIM1+shOrai1组细胞内Ca2+浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节CaSR，并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。

基质相互作用分子1； 钙释放激活钙通道蛋白1； 钙敏感受体； 一氧化氮

钙离子……